| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| ·褐飞虱对水稻的危害及研究进展 | 第12-13页 |
| ·昆虫P450的研究进展及研究动态 | 第13-15页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第15-18页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第15-17页 |
| ·昆虫细胞培养的研究现状 | 第17-18页 |
| ·交配辅助遗传整合克隆(MAGIC) | 第18-20页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 褐飞虱CYP4CE1和家蝇NADPH细胞色素还原酶基因重组杆状病毒的构建 | 第21-36页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第21-23页 |
| ·供试昆虫 | 第21页 |
| ·菌株、细胞株和质粒载体 | 第21页 |
| ·药品试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·常用试剂溶液 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·褐飞虱和家蝇总RNA的提取 | 第23-25页 |
| ·mRNA的反转录 | 第25页 |
| ·特异性引物设计及合成 | 第25页 |
| ·克隆CYP4CE1和NADPH细胞色素还原酶基因 | 第25-28页 |
| ·MH-CYP4CE1、MH-NCPR重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体的构建 | 第29-30页 |
| ·昆虫Sf9细胞的传代培养 | 第30页 |
| ·昆虫Sf9细胞的冻存 | 第30页 |
| ·CYP4CEl和NCPR重组病毒的制备及扩增 | 第30-32页 |
| ·实验结果 | 第32-36页 |
| ·褐飞虱和家蝇总RNA的提取与检测 | 第32-33页 |
| ·褐飞虱CYP4CEl和家蝇NADPH细胞色素P450还原酶基因的扩增 | 第33页 |
| ·MH-CYP4CEl、MH-NCPR重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体构建 | 第34-36页 |
| 第三章 CYP4CEl和NADPH细胞色素还原酶重组蛋白表达 | 第36-47页 |
| ·实验材料、试剂 | 第36-38页 |
| ·细胞株 | 第36页 |
| ·药品试剂 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·常用试剂溶液 | 第36-38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·昆虫Sf9细胞的复苏 | 第38页 |
| ·昆虫Sf9细胞的传代培养 | 第38页 |
| ·Western印记杂交鉴定蛋白表达 | 第38-41页 |
| ·CYP4CEl和NADPH细胞色素还原酶基因共表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白表达 | 第42页 |
| ·Bradford粗略测定总蛋白浓度 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·Western印迹杂交鉴定蛋白表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·测定总蛋白浓度 | 第45-47页 |
| 第四章 褐飞虱CYP4CE1重组蛋白的活性鉴定 | 第47-50页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第47页 |
| ·实验试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47页 |
| ·底物苯巴比妥的HPLC分析 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·CYP4CE1重组酶活性鉴定 | 第47-50页 |
| 讨论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
