| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.水产养殖微生物病害及防治现状 | 第10-11页 |
| 2 细菌耐药性的产生及作用机理 | 第11-17页 |
| ·生化机制 | 第11-13页 |
| ·遗传学机制 | 第13-15页 |
| ·主要抗菌药物及耐药机制 | 第15-17页 |
| 3 水产养殖细菌耐药性的研究 | 第17-18页 |
| 4 本研究的目的和拟解决的问题 | 第18-19页 |
| 第二章 水产致病菌耐药基因的研究 | 第19-31页 |
| 1.实验材料与设备 | 第19-20页 |
| ·菌株来源 | 第19页 |
| ·实验所需药品及试剂 | 第19页 |
| ·培养基的处理 | 第19页 |
| ·PCR试剂 | 第19-20页 |
| ·质控菌株 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| 2 抗生素抗性细菌的蹄选 | 第20-21页 |
| ·养殖水体耐药性细菌的蹄选 | 第20-21页 |
| ·养殖动物肠道耐药性细菌的筛选 | 第21页 |
| 3 水产致病菌耐药基因的筛选 | 第21-23页 |
| ·药敏试验 | 第21页 |
| ·耐药基因检测 | 第21-23页 |
| 4 结果 | 第23-28页 |
| ·养殖水体及肠道耐药性细菌的蹄选 | 第23页 |
| ·养殖水体及肠道细菌对磺胺耐药率的比较 | 第23-24页 |
| ·养殖水体及肠道细菌对氯霉素耐药率的比较 | 第24-25页 |
| ·药敏试验结果 | 第25-26页 |
| ·质粒检测结果 | 第26-27页 |
| ·耐药基因检测结果 | 第27-28页 |
| 5 讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 哈维氏弧菌磺胺耐药基因的克隆及序列分析 | 第31-43页 |
| 1 试验材料 | 第31-33页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·主要酶和试剂 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·克隆载体 | 第33页 |
| ·试剂盒 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-37页 |
| ·引物设计与合成 | 第33页 |
| ·哈维氏弧菌的处理 | 第33-34页 |
| ·SulⅡ基因片段的PCR扩增 | 第34页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第34-35页 |
| ·SulⅡ基因片段的克隆 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| ·SulⅡ基因片段的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的克隆及阳性克隆的蹄选 | 第38页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·克隆质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·克隆质粒的序列分析 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·SulⅡ耐药基因的克隆及同源性分析 | 第41-43页 |
| 第四章 哈维氏弧菌耐药基因的原核表达 | 第43-54页 |
| 1. 材料 | 第43-45页 |
| ·菌株与载体 | 第43页 |
| ·试剂和仪器 | 第43-45页 |
| 2 重组表达质粒的构建 | 第45-49页 |
| ·pMD18-TSulⅡ重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·诱导表达 | 第47-48页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第48-49页 |
| ·诱导表达菌的药敏试验 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| ·目的基因片段与表达载体的双酶切及回收 | 第49-50页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接与转化 | 第50页 |
| ·重组表达质粒的PCR及酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·SDS-聚两稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果 | 第51-52页 |
| ·诱导表达菌的药敏试验结果 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63页 |