| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 縮略词表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-35页 |
| 第一章 硒的简介 | 第16-21页 |
| 1 硒的理化性质 | 第16页 |
| 2 硒的研究历史 | 第16-17页 |
| 3 环境中的硒 | 第17-18页 |
| 4 纳米硒 | 第18-19页 |
| 5 酵母硒 | 第19-21页 |
| 第二章 硒的代谢 | 第21-32页 |
| 1 植物的硒代谢 | 第21-28页 |
| ·植物对硒酸盐的吸收 | 第21-23页 |
| ·植物对亚硒酸盐的吸收 | 第23-24页 |
| ·硒酸盐和亚硒酸盐在植物体内的同化和代谢 | 第24-27页 |
| ·ATP硫酸化酶 | 第26-27页 |
| ·APSe还原 | 第27页 |
| ·半胱氨酸裂解酶 | 第27页 |
| ·植物体对硒的耐受程度 | 第27-28页 |
| 2 微生物的硒代谢 | 第28-30页 |
| ·大肠杆菌硒代谢 | 第28-29页 |
| ·藻类的硒代谢 | 第29-30页 |
| ·球形红细菌的硒代谢 | 第30页 |
| 3 硒与人类健康 | 第30-32页 |
| 第三章 本课题研究目的及意义 | 第32-35页 |
| 第二部分 研究内容 | 第35-78页 |
| 第一章 球形红细菌硫酸盐活化酶复合体的纯化和活性测定 | 第35-49页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-45页 |
| ·酶和常用试剂 | 第36页 |
| ·菌株和载体 | 第36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·质粒的转化 | 第38页 |
| ·球形红细菌SAC的诱导表达 | 第38页 |
| ·球形红细菌SAC蛋白的纯化 | 第38-41页 |
| ·蛋白纯化的原理 | 第38-39页 |
| ·菌体预处理 | 第39页 |
| ·Ni-NTA His·Bind Superflow亲和层析 | 第39-40页 |
| ·Glutathione-Sepharose亲和层析 | 第40页 |
| ·切除标签 | 第40-41页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第41-43页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理 | 第41-42页 |
| ·制胶 | 第42页 |
| ·上样 | 第42-43页 |
| ·染色 | 第43页 |
| ·脱色 | 第43页 |
| ·拍照 | 第43页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| ·试剂配制 | 第43页 |
| ·标准曲线的制作 | 第43-44页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第44页 |
| ·球形红细菌SAC蛋白活性的测定 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白的诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·蛋白定量 | 第46-47页 |
| ·球形红细菌SAC活性测定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第二章 球形红细菌硫酸盐活化酶复合体硒酸盐底物通道的分析 | 第49-62页 |
| 1 前言 | 第49-50页 |
| 2 材料与仪器 | 第50页 |
| ·酶与生化试剂 | 第50页 |
| ·使用的仪器和软件 | 第50页 |
| 3 SAC底物通道的分析 | 第50-55页 |
| ·APSe水解 | 第50-51页 |
| ·APSe磷酸化 | 第51-52页 |
| ·APSR催化的APSe还原 | 第52-53页 |
| ·APSR与APSK竞争 | 第53-54页 |
| ·ncSAC底物通道的分析 | 第54页 |
| ·野生型SAC底物通道的分析 | 第54-55页 |
| 4 SAC催化PAPSe的生成 | 第55-57页 |
| 5 Se~0的生成 | 第57-59页 |
| ·SAC浓度对Se~0生成的影响 | 第57-58页 |
| ·GSH浓度对Se~0生成的影响 | 第58页 |
| ·ATPS对Se~0生成的影响 | 第58-59页 |
| 6 GSH介导GS-Se-SG的生成 | 第59-60页 |
| 7 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 sac替换大肠杆菌cysD突变株生理功能分析 | 第62-78页 |
| 1 前言 | 第62-64页 |
| 2 材料与方法 | 第64-72页 |
| ·酶与生化试剂 | 第64页 |
| ·菌株和载体 | 第64-65页 |
| ·pSKB4-cysDN质粒的提取 | 第65页 |
| ·引物的稀释 | 第65页 |
| ·PCR扩增条件及电泳检测 | 第65-66页 |
| ·Kan抗性序列及其启动子PCR条件 | 第65-66页 |
| ·cysD和sac的PCR条件 | 第66页 |
| ·电泳检测 | 第66页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第66-67页 |
| ·酶切 | 第67页 |
| ·酶切产物纯化并回收 | 第67-68页 |
| ·连接 | 第68页 |
| ·T-A连接 | 第68页 |
| ·酶切连接 | 第68页 |
| ·转化 | 第68页 |
| ·质粒验证 | 第68-69页 |
| ·pUC18-kan抗性验证 | 第68-69页 |
| ·菌液PCR验证 | 第69页 |
| ·构建pSKB4-cysD_F-sac-kan-cysD_R载体 | 第69-70页 |
| ·转化片段的制备 | 第70页 |
| ·DY330感受态的制备 | 第70-71页 |
| ·电转化 | 第71页 |
| ·抗性筛选检测转化子 | 第71-72页 |
| ·转化子的检测 | 第72页 |
| ·提取DY330(cysD∷sac)基因组 | 第72页 |
| ·PCR检测DY330(cysD∷sac)基因组 | 第72页 |
| ·生理功能检测 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-76页 |
| ·引物的设计 | 第72-73页 |
| ·载体构建PCR验证 | 第73页 |
| ·突变菌株DY330(cysD∷sac)-3的PCR验证 | 第73-75页 |
| ·突变菌株DY330(cysD∷sac)-3生长状态 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 结论和展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
