| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·过敏反应概述 | 第14-15页 |
| ·过敏反应的机制 | 第14-15页 |
| ·植物过敏蛋白 | 第15-22页 |
| ·植物过敏蛋白的分类 | 第15-18页 |
| ·植物过敏原蛋白的特性 | 第18-20页 |
| ·植物过敏原蛋白的生理功能 | 第20-22页 |
| ·低敏植物性食品的开发研究 | 第22-25页 |
| ·低敏植物品种的培育 | 第22-24页 |
| ·植物性食品的脱敏 | 第24-25页 |
| ·荞麦过敏的研究现状 | 第25-28页 |
| ·荞麦过敏症研究 | 第26页 |
| ·荞麦中过敏蛋白研究 | 第26-28页 |
| ·选题依据 | 第28-29页 |
| 第二章 苦荞16kDa 过敏原cDNA 序列的生物信息分析 | 第29-34页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29页 |
| ·TBW16 的序列分析 | 第29页 |
| ·TBW16 的功能结构预测 | 第29页 |
| ·TBW16 系统发育树的构建及抗原表位预测 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-33页 |
| ·TBW16 的序列分析 | 第29-30页 |
| ·TBW16 的功能结构预测 | 第30-32页 |
| ·TBW16 系统发育树的构建及抗原表位预测 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 苦荞16kDa 过敏原表达载体的构建及原核表达 | 第34-46页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·主要的工具酶、试剂和溶液 | 第34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·苦荞过敏原的原核表达载体构建 | 第34-37页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白可溶性表达分析 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·16kDa 过敏原基因的 PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·目的蛋白表达检测 | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的表达条件优化 | 第41-43页 |
| ·目的蛋白可溶性表达分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 rTBW16 和rcTBW16 的包涵体复性及亲和纯化 | 第46-52页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·包涵体复性溶液 | 第46页 |
| ·蛋白纯化溶液 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·包涵体的纯化 | 第46-47页 |
| ·包涵体复性 | 第47页 |
| ·钴离子螯合层析纯化目的蛋白 | 第47页 |
| ·目的蛋白His 标签鉴定 | 第47页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·包涵体的纯化 | 第47-48页 |
| ·包涵体复性 | 第48页 |
| ·钴离子金属螯合层析纯化目的蛋白 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白His 标签的鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 重组蛋白（rcTBW16)的免疫活性鉴定 | 第52-58页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·血清材料 | 第52页 |
| ·ELISA 试剂与材料 | 第52页 |
| ·免疫印迹试剂与材料 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·竞争性ELSIA | 第53-54页 |
| ·IgE 免疫印迹 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-56页 |
| ·竞争性ELISA | 第55-56页 |
| ·IgE 免疫印迹 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 天然TBW16 的定位及分离鉴定 | 第58-65页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·PAGE 电泳试剂 | 第58页 |
| ·Western blotting 试剂 | 第58-59页 |
| ·电洗脱试剂 | 第59页 |
| ·实验仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-61页 |
| ·苦荞种子清蛋白、球蛋白的 Western blotting 分析 | 第59-60页 |
| ·苦荞种子胚和胚乳的Western blotting 分析 | 第60页 |
| ·天然TBW16 的分离鉴定 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-64页 |
| ·苦荞种子清蛋白、球蛋白的 Western blotting 分析 | 第61页 |
| ·胚和胚乳蛋白的 Western blotting 分析 | 第61-62页 |
| ·苦荞16kDa 过敏原的分离及Western blotting 鉴定 | 第62-63页 |
| ·N 端测序及质谱鉴定 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第七章 TBW16 稳定性分析及α-淀粉酶抑制剂活性鉴定 | 第65-73页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·主要材料 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·TBW16 的热稳定性分析 | 第65-66页 |
| ·TBW16 的胃蛋白酶消化实验 | 第66页 |
| ·α-淀粉酶抑制剂的活性测定 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-71页 |
| ·TBW16 的热稳定性分析 | 第67-69页 |
| ·胃蛋白酶消化实验 | 第69-71页 |
| ·α-淀粉酶抑制剂活性测定 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第八章 苦荞 16kDa 过敏原的植物表达载体构建及转化拟南芥 | 第73-79页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·实验试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·植物表达载体构建 | 第73-75页 |
| ·拟南芥的培养 | 第75页 |
| ·转化拟南芥 | 第75-76页 |
| ·阳性植株的筛选 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-77页 |
| ·重组载体 pBIN438 的双酶切鉴定 | 第76-77页 |
| ·阳性植株的筛选 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第九章 总结与展望 | 第79-81页 |
| ·总结 | 第79-80页 |
| ·展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 作者简介 | 第96页 |
