| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 前言 | 第14-35页 |
| ·ZYMV的发现及寄主范围 | 第15页 |
| ·ZYMV引起的症状 | 第15-19页 |
| ·寄主对症状的影响 | 第16页 |
| ·温度对症状的影响 | 第16-17页 |
| ·混合侵染对症状的影响 | 第17-18页 |
| ·病毒基因与症状的关系 | 第18-19页 |
| ·ZYMV的株系分类 | 第19-21页 |
| ·根据症状分类 | 第19-20页 |
| ·根据寄主范围分类 | 第20页 |
| ·根据蚜虫传播特征分类 | 第20-21页 |
| ·根据序列特征分类 | 第21页 |
| ·ZYMV CP和HC-Pro的研究 | 第21-26页 |
| ·CP的研究 | 第22-24页 |
| ·HC-Pro的研究 | 第24-26页 |
| ·ZYMV的传播途径 | 第26-28页 |
| ·蚜虫传播 | 第26-27页 |
| ·种子传播 | 第27页 |
| ·新鲜果实传播 | 第27-28页 |
| ·ZYMV的防治 | 第28-33页 |
| ·控制传播媒介 | 第28页 |
| ·交叉保护作用 | 第28-31页 |
| ·交叉保护作用的应用 | 第28-29页 |
| ·弱毒株获得的方法 | 第29-30页 |
| ·交叉保护作用的机理 | 第30-31页 |
| ·分子植物育种 | 第31-33页 |
| ·来自病毒的抗性 | 第32页 |
| ·RNAi机制 | 第32-33页 |
| ·研究的目的与意义 | 第33-35页 |
| 2 小西葫芦黄化花叶病毒罗汉果分离株抗血清的制备和应用 | 第35-58页 |
| ·引言 | 第35-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·感病罗汉果种子的获得 | 第37页 |
| ·田间调查 | 第37-38页 |
| ·病毒的繁殖 | 第38页 |
| ·繁殖寄主的种植 | 第38页 |
| ·病毒的接种繁殖 | 第38页 |
| ·病毒的提取 | 第38-39页 |
| ·病毒粗提液的获得 | 第38-39页 |
| ·病毒的精提纯 | 第39页 |
| ·病毒的浓度及纯度测定 | 第39页 |
| ·抗体的制备 | 第39-40页 |
| ·提纯病毒液免疫新西兰大白兔 | 第39-40页 |
| ·抗体的收集 | 第40页 |
| ·抗体的处理 | 第40-41页 |
| ·健康西葫芦叶片汁液吸附处理 | 第40页 |
| ·健康西葫芦叶片总蛋白提取 | 第40-41页 |
| ·处理后抗体效价测定 | 第41页 |
| ·罗汉果种子传毒率检测 | 第41-42页 |
| ·实生苗的生物学鉴定 | 第41页 |
| ·实生苗总RNA提取 | 第41页 |
| ·检测引物的设计 | 第41-42页 |
| ·酶切鉴定PCR产物 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-55页 |
| ·田间发病率调查 | 第42-43页 |
| ·病毒浓度测定结果 | 第43-44页 |
| ·最佳抗体处理方法的确定及效价测定 | 第44-45页 |
| ·果园及其附近植物带毒率检测 | 第45-50页 |
| ·罗汉果种子传毒率检测 | 第50-55页 |
| ·田间罗汉果病株的确定 | 第50-51页 |
| ·酶切鉴定PCR产物 | 第51-53页 |
| ·实生苗生物鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·实生苗RT-PCR检测结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 3 ZYMV-LHG分离株的进化分析 | 第58-84页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·材料与方法 | 第59-64页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·实验试剂 | 第59-60页 |
| ·特异性引物设计及合成 | 第60页 |
| ·感病罗汉果总RNA提取 | 第60页 |
| ·目的片段的RT-PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·PCR产物的克隆与序列测定 | 第61-62页 |
| ·目的PCR片断回收 | 第61-62页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第62页 |
| ·RbCl法制备大肠杆菌感受态 | 第62-63页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第63页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·碱裂解法小量质粒提取 | 第63页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·软件分析 | 第64页 |
| ·用于分析的ZYMV株系 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-80页 |
| ·ZYMV-LHG不同株系的采集 | 第64页 |
| ·ZYMV CP基因扩增及克隆鉴定 | 第64-68页 |
| ·ZYMV CP的基因特征 | 第68-69页 |
| ·ZYMV-LHG CP基因的核苷酸和氨基酸同源性分析 | 第69-71页 |
| ·ZYMV-LHG CP核苷酸多态性及进化分析 | 第71-75页 |
| ·线性抗原表位预测 | 第75-77页 |
| ·模型种类和参数 | 第77-79页 |
| ·ZYMV的进化分析及最近共同祖先推断 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-84页 |
| 4. 罗汉果遗传转化体系的构建及转基因罗汉果的研究 | 第84-106页 |
| ·引言 | 第84-85页 |
| ·材料与方法 | 第85-91页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·菌株及质粒 | 第85-86页 |
| ·抗生素及植物生长素 | 第86页 |
| ·外植体的获得 | 第86页 |
| ·种子的收获 | 第86页 |
| ·种子的播种及子叶外植体的获得 | 第86页 |
| ·真叶外植体获得 | 第86页 |
| ·罗汉果转化体系的建立 | 第86-87页 |
| ·最适外植体的筛选 | 第86-87页 |
| ·卡那霉素浓度的筛选 | 第87页 |
| ·最佳的头孢霉素浓度的筛选 | 第87页 |
| ·罗汉果遗传转化 | 第87-88页 |
| ·外植体预培养 | 第87页 |
| ·转化农杆菌的培养 | 第87页 |
| ·外植体与农杆菌共培养 | 第87-88页 |
| ·筛选分化 | 第88页 |
| ·生根 | 第88页 |
| ·抗性苗的繁殖 | 第88页 |
| ·移栽 | 第88页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第88-91页 |
| ·ZYMV CP和NIb基因二级结构预测及引物的设计和合成 | 第88-89页 |
| ·RNAi干扰载体的获得 | 第89-90页 |
| ·目的片段的获得 | 第90-91页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第91页 |
| ·植物双元表达载体转化农杆菌 | 第91页 |
| ·结果 | 第91-104页 |
| ·罗汉果的遗传转化体系的构建 | 第91-93页 |
| ·最适外植体的筛选 | 第91-92页 |
| ·最适筛选压力的选择 | 第92页 |
| ·头孢霉素(Cef)对罗汉果再生植株生根的影响 | 第92-93页 |
| ·CP和NIb基因的RNA二级结构预测 | 第93页 |
| ·ZYMVCP ZYMVNIb干扰载体构建 | 第93-102页 |
| ·干扰片段的PCR扩增及克隆 | 第93-94页 |
| ·干扰片段连接到植物双元表达载体上 | 第94-96页 |
| ·pBI121ZYMVCPRNAi和pBI121ZYMVNIbRNAi转化罗汉果 | 第96-102页 |
| ·转基因罗汉果的分子生物学鉴定 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| 5 全文总结与讨论 | 第106-114页 |
| ·全文总结 | 第106-110页 |
| ·ZYMV-LHG抗血清的制备和田间调查研究 | 第106-107页 |
| ·ZYMV-LHG进化分析 | 第107-109页 |
| ·罗汉果遗传转化体系的构建及转基因罗汉果的获得 | 第109-110页 |
| ·全文讨论 | 第110-112页 |
| ·论文创新点 | 第112-113页 |
| ·后续工作 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-130页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第130页 |
