山羊BLG调控序列及CMV增强子指导人胰岛素原基因在细胞和小鼠中表达
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-25页 |
| 1 乳腺系统基因表达的主要调控机制 | 第10-13页 |
| ·启动子 | 第10-11页 |
| ·增强子 | 第11页 |
| ·内含子，3′端加尾序列 | 第11-12页 |
| ·顺式作用元件 | 第12页 |
| ·反式作用因子 | 第12-13页 |
| 2 转基因动物乳腺生物反应器模型的建立 | 第13-16页 |
| ·乳腺特异性表达载体BIC13 | 第13-14页 |
| ·乳腺生物反应器细胞模型的建立 | 第14页 |
| ·乳腺生物反应器小鼠模型的建立 | 第14-15页 |
| ·显微注射法制备转基因动物 | 第15-16页 |
| 3 动物乳腺生物反应器的发展状况 | 第16-18页 |
| 4 人胰岛素的生化、分泌及相关研究进展 | 第18-25页 |
| ·分子生物学特性 | 第18-19页 |
| ·胰岛素的分泌、调控及代谢 | 第19-22页 |
| ·重组人胰岛素的相关研究进展 | 第22-25页 |
| ·微生物发酵法 | 第22-23页 |
| ·哺乳动物细胞培养法 | 第23页 |
| ·乳腺生物反应器法 | 第23-25页 |
| 第二章 建立表达人胰岛素原基因的乳腺上皮细胞株 | 第25-39页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| ·主要材料 | 第25页 |
| ·实验器材与仪器设备 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·有关试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| ·细胞的培养及纯化 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆细胞株的建立 | 第28-31页 |
| ·乳腺特异性载体的准备 | 第28-29页 |
| ·BIC13 质粒的大规模提取和纯化 | 第29页 |
| ·电转染乳腺上皮细胞的方法 | 第29-30页 |
| ·药物筛选 | 第30-31页 |
| ·细胞株的扩大培养 | 第31页 |
| ·阳性细胞株的PCR 检测 | 第31-33页 |
| ·细胞染色体DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·转染后细胞外源基因PCR 检测 | 第32-33页 |
| ·整合外源基因的细胞的诱导表达及ELISA 检测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·乳腺上皮细胞原代培养 | 第34页 |
| ·细胞转染 | 第34-35页 |
| ·阳性细胞的PCR 检测 | 第35-36页 |
| ·细胞上清液ELISA 检测 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 转基因小鼠的制备及整合检测与表达检测 | 第39-48页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| ·试验动物来源 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·主要药品与试剂 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第40-41页 |
| ·显微注射用目的片段的制备 | 第40页 |
| ·超数排卵 | 第40页 |
| ·取卵 | 第40页 |
| ·显微注射 | 第40-41页 |
| ·输卵管胚胎移植 | 第41页 |
| ·转基因小鼠的整合检测 | 第41-42页 |
| ·鼠尾基因组DNA 提取 | 第41页 |
| ·转基因小鼠PCR 方法检测 | 第41-42页 |
| ·阳性转基因小鼠的表达检测 | 第42-43页 |
| ·阳性转基因小鼠的乳汁检测 | 第42-43页 |
| ·阳性转基因小鼠的血液检测 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·显微注射的结果 | 第43-44页 |
| ·阳性转基因小鼠PCR 检测结果 | 第44页 |
| ·阳性转基因小鼠乳样ELISA 结果 | 第44-45页 |
| ·阳性转基因小鼠血清ELISA 结果 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
