| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| ·褐藻胶 | 第14-15页 |
| ·褐藻胶的组成结构 | 第14页 |
| ·褐藻胶的来源 | 第14页 |
| ·褐藻胶及褐藻寡糖的应用 | 第14-15页 |
| ·褐藻胶降解方法 | 第15-16页 |
| ·褐藻胶裂解酶 | 第16-21页 |
| ·褐藻胶裂解酶的来源 | 第16页 |
| ·褐藻胶裂解酶的作用机理 | 第16-17页 |
| ·褐藻胶裂解酶的分类 | 第17页 |
| ·褐藻胶裂解酶活性检测方法 | 第17-18页 |
| ·褐藻胶裂解酶的理化性质 | 第18-19页 |
| ·褐藻胶裂解酶的结构特征 | 第19-20页 |
| ·褐藻胶裂解酶的基因工程研究 | 第20页 |
| ·藻胶裂解酶的应用 | 第20-21页 |
| ·本研究的内容及预期目标 | 第21-23页 |
| ·本研究的内容 | 第21-22页 |
| ·预期目标 | 第22-23页 |
| 第二章 产褐藻胶裂解酶的发酵条件优化 | 第23-37页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·材料与设备 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·实验仪器及设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-26页 |
| ·酶活力的测定 | 第24页 |
| ·种子液的制备 | 第24-25页 |
| ·单因素实验 | 第25-26页 |
| ·海带粉碳源浓度对产酶能力的影响 | 第25页 |
| ·氮源（蛋白胨）添加量对产酶能力的影响 | 第25页 |
| ·初始pH 对产酶能力的影响 | 第25页 |
| ·温度对产酶能力的影响 | 第25页 |
| ·转速对产酶能力的影响 | 第25页 |
| ·接种量对产酶能力的影响 | 第25-26页 |
| ·摇瓶培养基装液量对产酶能力的影响 | 第26页 |
| ·培养时间对产酶能力的影响 | 第26页 |
| ·Plackett-Burman 法筛选影响产酶的重要因素 | 第26页 |
| ·响应面实验 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-36页 |
| ·单因素实验结果 | 第26-31页 |
| ·碳源（海带粉）添加量对产酶能力的影响 | 第26-27页 |
| ·氮源（蛋白胨）添加量对产酶能力的影响 | 第27-28页 |
| ·初始pH 对产酶能力的影响 | 第28页 |
| ·温度对产酶能力的影响 | 第28-29页 |
| ·转速对产酶能力的影响 | 第29-30页 |
| ·接种量对产酶能力的影响 | 第30页 |
| ·摇瓶培养基装液量对产酶能力的影响 | 第30-31页 |
| ·培养时间对产酶能力的影响 | 第31页 |
| ·影响褐藻胶裂解酶产生的关键因素确定 | 第31-32页 |
| ·关键因素对酶活的影响 | 第32-36页 |
| ·酶活多元二次模型方程的建立 | 第32-34页 |
| ·酶活响应面分析与优化 | 第34-36页 |
| ·寻求最优值 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第三章 褐藻胶裂解酶基因的克隆 | 第37-46页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与设备 | 第37-39页 |
| ·菌种 | 第37页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第37-38页 |
| ·实验仪器及设备 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·LB 培养基 | 第39页 |
| ·含Amp 的LB 平板的制备 | 第39页 |
| ·LB 抗性平板的制备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·微生物基因组DNA 提取 | 第39-40页 |
| ·引物设计与PCR 反应条件 | 第40-41页 |
| ·algL 基因的克隆 | 第40页 |
| ·algL 基因PCR 反应条件 | 第40-41页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第41页 |
| ·PCR 产物或酶切产物条带的回收 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物与克隆载体的连接 | 第42页 |
| ·连接液转化大肠杆菌并进行蓝白斑筛选 | 第42页 |
| ·阳性克隆的PCR 验证 | 第42-43页 |
| ·基因的序列测定 | 第43页 |
| ·ALGL 的蛋白序列分析 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·algL 基因扩增 | 第43-44页 |
| ·algL 基因序列分析 | 第44页 |
| ·不同微生物来源褐藻胶裂解酶氨基酸序列比对分析 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第四章 褐藻胶裂解酶基因的原核表达 | 第46-59页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·材料与设备 | 第46-49页 |
| ·菌种 | 第46-47页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第47页 |
| ·实验仪器及设备 | 第47页 |
| ·主要试剂的配置 | 第47-49页 |
| ·磷酸缓冲盐溶液（PBS） | 第47页 |
| ·10×SDS-PAGE 电泳缓冲液 | 第47-48页 |
| ·2×SDS-PAGE 上样缓冲液 | 第48页 |
| ·30%丙烯酰胺溶液（凝胶储备液） | 第48页 |
| ·1.5mol/L Tris-Hcl (pH 8.8) | 第48页 |
| ·1.0mol/L Tris-Hcl (pH 6.8) | 第48页 |
| ·10%SDS | 第48页 |
| ·10%过硫酸铵(AP) | 第48页 |
| ·四甲基乙二胺(TEMED) | 第48页 |
| ·脱色液 | 第48-49页 |
| ·考马斯亮兰染色液 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·algL 基因的获得 | 第49页 |
| ·algL 基因双酶切 | 第49-50页 |
| ·质粒的提取 | 第50-51页 |
| ·质粒的双酶切 | 第51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第52页 |
| ·基因工程菌的双酶切鉴定 | 第52页 |
| ·工程菌的诱导表达及重组蛋白表达形式鉴定 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白方法 | 第52-53页 |
| ·褐藻胶裂解酶基因的诱导表达条件优化 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·pET30a-algl 重组表达载体的构建及鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达条件优化 | 第56-58页 |
| ·IPTG 浓度 | 第56页 |
| ·培养时间 | 第56-57页 |
| ·培养温度 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第五章 褐藻胶裂解酶重组蛋白的纯化及性质研究 | 第59-65页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料与设备 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·1×Ni-NAT 结合缓冲液 | 第59页 |
| ·1×Ni-NAT 漂洗缓冲液 | 第59页 |
| ·1×Ni-NAT 洗脱缓冲液 | 第59页 |
| ·实验仪器及设备 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·重组酶粗酶液的制备 | 第60页 |
| ·重组酶的纯化 | 第60页 |
| ·Bradford 定量测定蛋白浓度 | 第60页 |
| ·ALGL 酶学性质研究 | 第60-61页 |
| ·ALGL 最适催化pH 和pH 稳定性测定 | 第60页 |
| ·ALGL 最适催化反应温度和温度稳定性测定 | 第60-61页 |
| ·ALGL 金属离子、抑制剂等物质对ALGL 酶活力影响的测定 | 第61页 |
| ·ALGL 酶催化反应动力学研究 | 第61页 |
| ·实验结果 | 第61-64页 |
| ·ALGL 的纯化及酶活测定结果 | 第61页 |
| ·ALGL 的酶学性质研究 | 第61-63页 |
| ·pH 对ALGL 酶活力和稳定性的影响 | 第61-62页 |
| ·温度对ALGL 酶活力和稳定性的影响 | 第62页 |
| ·金属离子、EDTA 对ALGL 酶活力的影响 | 第62-63页 |
| ·ALGL 酶催化反应动力学研究 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 目录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
