| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-15页 |
| 1 Ghrelin的发现 | 第9页 |
| 2 Ghrelin的结构及生化特征 | 第9-10页 |
| 3 受体分布 | 第10-11页 |
| 4 Ghrelin的生物学作用 | 第11-13页 |
| 5 Ghrelin对心脏功能的影响 | 第13-14页 |
| 6 其他作用 | 第14页 |
| 7 实验的目的和意义 | 第14-15页 |
| 实验一 猪Ghrelin基因的克隆和原核表达 | 第15-30页 |
| 1 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·克隆载体 | 第15页 |
| ·表达载体 | 第15页 |
| ·酶与试剂 | 第15-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第17页 |
| ·pGhrelin cDNA的克隆 | 第17-21页 |
| ·pGhrelin原核表达质粒的构建 | 第21页 |
| ·pGhrelin在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第21页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第21-23页 |
| 2 结果 | 第23-28页 |
| ·pGhrelin cDNA片段的RT-PCR扩增结果 | 第23页 |
| ·猪下丘脑总RNA的提取结果 | 第23页 |
| ·pGhrelin cDNA片段的RT-PCR扩增结果 | 第23页 |
| ·pGhrelin克隆载体的构建 | 第23页 |
| ·PCR产物克隆 | 第23页 |
| ·克隆质粒的酶切鉴定 | 第23页 |
| ·克隆质粒的PCR鉴定 | 第23页 |
| ·表达载体与目的基因的连接与转化 | 第23-28页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第23页 |
| ·质粒PCR鉴定 | 第23-28页 |
| ·重组基因的诱导表达 | 第28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 4 小结 | 第29-30页 |
| 实验二 DNA免疫pGhrelin抗血清的制备 | 第30-48页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·表达载体 | 第30页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·酶与试剂 | 第30-31页 |
| ·Western-blot试验试剂 | 第31页 |
| ·ELISA实验试剂的配制: | 第31页 |
| ·主要器材 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·pGhrelin cDNA的RT-PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·pGhrelin cDNA的克隆 | 第32页 |
| ·DNA免疫重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·限制性内切酶水解反应和PCR鉴定 | 第32页 |
| ·质粒的大量提取与纯化 | 第32-33页 |
| ·动物免疫 | 第33页 |
| ·ELISA法检测 | 第33页 |
| ·真核表达产物的Western-blot实验 | 第33-34页 |
| ·Ghrelin免疫阳性细胞分布 | 第34-35页 |
| ·免疫组织化学 | 第34-35页 |
| ·Ghrelin免疫阳性细胞观察 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-46页 |
| ·本实验流程图 | 第35页 |
| ·猪下丘脑总RNA的提取结果 | 第35页 |
| ·pGhrelin cDNA的RT-PCR结果 | 第35页 |
| ·pGhrelin cDNA克隆质粒的PCR鉴定结果 | 第35页 |
| ·序列测定结果 | 第35-39页 |
| ·DNA免疫用pVAX-pGhrelin质粒的酶切鉴定结果 | 第39页 |
| ·pVAX-pGhrelin质粒免疫小鼠的效果检测 | 第39页 |
| ·Western-Blotting检测 | 第39页 |
| ·猪Ghrelin IR细胞的体内分布 | 第39-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
