| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-22页 |
| 1 MIRNA的简介 | 第10-16页 |
| ·miRNA的发现及命名 | 第10-11页 |
| ·miRNA的特点 | 第11-12页 |
| ·miRNA的形成及其作用机制 | 第12-13页 |
| ·miRNA生物学功能研究进展 | 第13-15页 |
| ·miRNA的检测技术与研究方法 | 第15-16页 |
| 2 其它主要小RNA的简介 | 第16-19页 |
| ·siRNA | 第16-17页 |
| ·PIWI-interacting RNA(piRNA) | 第17-19页 |
| 3 猪睾丸组织MIRNA研究有助于解析睾丸发育的复杂基因控制网络 | 第19-20页 |
| 4 目的与意义 | 第20-22页 |
| 第一章 MIRNA的分离鉴定及生物信息学分析 | 第22-39页 |
| 1 试验材料 | 第22-25页 |
| ·组织样品 | 第22-23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第23-24页 |
| ·主要耗材的处理 | 第24-25页 |
| ·生物信息学网站和分析软件 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-30页 |
| ·总RNA的提取及利用RT-PCR方法扩增cDNA | 第25-27页 |
| ·miRNA基因引物设计与合成 | 第27页 |
| ·miRNA基因的扩增 | 第27页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆及序列分析 | 第27-30页 |
| ·miRNA的靶基因搜索方法 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| ·猪睾丸组织总RNA的提取与质量检测及cDNA检测结果 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增结果 | 第32页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第32-33页 |
| ·靶基因搜索结果 | 第33-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| ·有关miRNA的分离鉴定 | 第36-37页 |
| ·有关靶基因预测 | 第37-39页 |
| 第二章 克隆所得部分MIRNA在大白猪不同发育时期睾丸组织中的表达分析 | 第39-51页 |
| 1 试验材料 | 第39-40页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第39页 |
| ·引物 | 第39-40页 |
| 2 试验方法 | 第40-42页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·半定量PCR cDNA的准备与检测 | 第40页 |
| ·实时定量PCR | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-48页 |
| ·发育时期表达谱 | 第42-47页 |
| ·表达谱分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·关于miRNA表达的检测方法 | 第48-49页 |
| ·关于pri-miRNA和miRNA表达鉴定的意义 | 第49-51页 |
| 第三章 大白猪睾丸组织4个MIRNAS表达载体的构建 | 第51-62页 |
| 1 试验材料 | 第51-53页 |
| ·细菌、细胞和质粒 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器和设备 | 第51-52页 |
| ·细胞培养耗材的处理 | 第52页 |
| ·细胞培养用液的配制 | 第52-53页 |
| 2 试验方法 | 第53-58页 |
| ·miRNA表达载体的构建 | 第53-56页 |
| ·细胞的培养与转染 | 第56-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-60页 |
| ·miRNA重组质粒的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR检测转染后miRNA的水平 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
