中文摘要 | 第1-15页 |
英文摘要 | 第15-21页 |
英文缩写符号及中英文对照表 | 第21-25页 |
1 引言 | 第25-44页 |
·光合作用的光抑制 | 第25-29页 |
·PSII 的光抑制 | 第25-27页 |
·低温条件下PSI 的光抑制 | 第27-29页 |
·光抑制、光破坏的防御机制 | 第29-35页 |
·减少光吸收,增加光能利用能力 | 第29-30页 |
·通过状态转换向PSI 分配较多的光能 | 第30-31页 |
·依赖于叶黄素循环的热耗散 | 第31-32页 |
·活性氧清除系统 | 第32-34页 |
·D_1 蛋白的周转 | 第34-35页 |
·高等植物体内的叶黄素循环 | 第35-40页 |
·叶黄素循环的组成 | 第35-37页 |
·叶黄素循环的主要功能 | 第37-39页 |
·热耗散 | 第37-38页 |
·防止膜脂过氧化 | 第38-39页 |
·稳定类囊体膜结构 | 第39页 |
·对蓝光的响应 | 第39页 |
·调节ABA合成 | 第39页 |
·叶黄素循环能量耗散的分子机理 | 第39-40页 |
·玉米黄质环氧化酶 | 第40-42页 |
·紫黄质脱环氧化酶 | 第42页 |
·本研究的目的、意义 | 第42-44页 |
2 材料与方法 | 第44-67页 |
·实验材料 | 第44-45页 |
·植物材料 | 第44页 |
·材料处理 | 第44页 |
·菌株与质粒 | 第44页 |
·酶及生化试剂 | 第44页 |
·PCR引物 | 第44-45页 |
·实验方法 | 第45-67页 |
·总RNA 的提取 | 第45-46页 |
·cDNA 第一条链的合成 | 第46-47页 |
·cDNA 纯化 | 第47页 |
·对cDNA 进行末端加尾 | 第47页 |
·番茄玉米黄质环氧化酶基因全长的克隆 | 第47-50页 |
·中间片段的获得 | 第47-48页 |
·5’RACE 获得5’端序列 | 第48-49页 |
·3’RACE 获得3’端序列 | 第49-50页 |
·番茄玉米黄质环氧化酶基因全长的克隆 | 第50页 |
·Northern 杂交分析 | 第50-53页 |
·总RNA 的提取 | 第50页 |
·甲醛变性胶电泳 | 第50-51页 |
·转膜 | 第51-52页 |
·预杂交 | 第52页 |
·探针的制备 | 第52-53页 |
·杂交 | 第53页 |
·洗膜 | 第53页 |
·放射自显影 | 第53页 |
·Southern 杂交分析 | 第53-55页 |
·基因组DNA 的提取 | 第53-54页 |
·基因组DNA 的限制性内切酶消化 | 第54页 |
·转膜及烘膜 | 第54页 |
·探针合成 | 第54页 |
·预杂交、杂交及放射自显影 | 第54-55页 |
·真核表达载体的构建 | 第55-59页 |
·正、反义表达载体的构建 | 第55页 |
·连接 | 第55页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
·转化及克隆筛选 | 第56页 |
·碱法小量提取质粒DNA | 第56-57页 |
·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第57页 |
·回收 | 第57页 |
·DNA 序列测定 | 第57-58页 |
·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第58页 |
·利用农杆菌介导转化番茄 | 第58-59页 |
·转基因番茄植株的PCR 检测 | 第59-61页 |
·CTAB 法微量法提取基因组DNA | 第59-60页 |
·转基因植株的PCR 筛选 | 第60-61页 |
·玉米黄质环氧化酶的原核表达及Western 杂交 | 第61-65页 |
·原核表达载体的构建 | 第61页 |
·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第61页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第61-62页 |
·抗体的制备 | 第62页 |
·抗血清效价的测定 | 第62页 |
·Western 杂交 | 第62-65页 |
·转基因番茄生理指标的测定 | 第65-67页 |
·放氧活性的测定 | 第65页 |
·荧光参数测定 | 第65页 |
·P700的820 nm光吸收 | 第65页 |
·叶黄素循环色素组分分析 | 第65页 |
·O_2~· 和H_2O_2的测定 | 第65-66页 |
·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第66页 |
·抗坏血酸(Ascorbate)含量的测定 | 第66页 |
·活性氧清除酶的活性测定 | 第66页 |
·可溶性蛋白的测定 | 第66-67页 |
3 结果与分析 | 第67-103页 |
·番茄玉米黄质环氧化酶基因的分离及表达分析 | 第67-79页 |
·LeZE基因的分离 | 第67-68页 |
·LeZE基因的序列分析 | 第68-73页 |
·LeZE基因编码蛋白的生化特性分析 | 第73-74页 |
·基因编码蛋白的疏水性分析 | 第73页 |
·LeZE基因表达产物跨膜特性分析 | 第73-74页 |
·LeZE基因在番茄中的表达分析 | 第74-75页 |
·LeZE基因在番茄不同器官中的表达 | 第74页 |
·低温弱光和强光处理下LeZE基因在番茄中的表达 | 第74-75页 |
·LeZE基因在大肠杆菌中的表达 | 第75-79页 |
·原核表达载体pET-LeZE的构建 | 第75-76页 |
·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第76-78页 |
·低温弱光和强光下LeZE在蛋白水平的表达特征 | 第78-79页 |
·LeZE在番茄中的遗传转化 | 第79-84页 |
·正、反义表达载体的构建 | 第79页 |
·正、反义表达载体的鉴定 | 第79-81页 |
·转正、反义LeZE基因植株的鉴定 | 第81-83页 |
·番茄 LeZE 基因 Southern 杂交分析 | 第83-84页 |
·转正、反义LeZE基因植株中LeVDE基因的表达 | 第84页 |
·LeZE的过量表达增加番茄PSII光抑制的敏感性 | 第84-92页 |
·转正义基因番茄叶黄素循环组分的变化 | 第84-85页 |
·LeZE 的过量表达对强光胁迫下番茄叶片光抑制的影响 | 第85-87页 |
·LeZE的过量表达对强光胁迫下NPQ的影响 | 第85页 |
·LeZE的过量表达对强光胁迫下叶黄素循环脱环氧化状态的影响 | 第85-86页 |
·LeZE的过量表达对强光胁迫下放氧速率的影响 | 第86-87页 |
·LeZE的过量表达增强了强光胁迫下PSII光抑制的敏感性 | 第87页 |
·LeZE 的过量表达对低温弱光胁迫下番茄叶片光抑制的影响 | 第87-92页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下NPQ的影响 | 第87页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下叶黄素循环脱环氧化状态的影响 | 第87-89页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下放氧速率的影响 | 第89页 |
·LeZE的过量表达增强了低温弱光胁迫下PSII光抑制的敏感性 | 第89页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下O_2~·和H_2O_2含量的影响 | 第89-90页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下番茄叶片MDA含量的影响 | 第90-91页 |
·LeZE的过量表达对低温弱光胁迫下PSI光抑制的影响 | 第91-92页 |
·转正义基因番茄对强光的适应 | 第92-94页 |
·在强光下生长的野生型和转基因植株的光合能力增强 | 第92-93页 |
·在强光下生长的野生型和转基因植株的Fv/Fm、ΦPSII和MDA含量 | 第93页 |
·在强光下生长的野生型和转基因植株的抗氧化系统的变化 | 第93-94页 |
·抑制LeZE的表达减轻番茄的低温光抑制 | 第94-103页 |
·转反义基因番茄叶黄素循环组分的变化 | 第94-95页 |
·抑制LeZE的表达对强光胁迫下番茄叶片光抑制的影响 | 第95-97页 |
·抑制LeZE的表达对强光胁迫下叶黄素循环脱环氧化状态的影响 | 第95页 |
·抑制LeZE的表达对强光胁迫下NPQ的影响 | 第95-96页 |
·抑制LeZE的表达对强光胁迫下PSII光抑制的影响 | 第96-97页 |
·抑制LeZE 的表达对低温弱光胁迫下番茄叶片光抑制的影响 | 第97-103页 |
·抑制LeZE 的表达对低温弱光胁迫下叶黄素循环脱环氧化状态的影响 | 第97页 |
·抑制LeZE的表达对低温弱光胁迫下NPQ的影响 | 第97-98页 |
·抑制LeZE的表达对低温弱光胁迫下放氧速率的影响 | 第98-99页 |
·抑制LeZE的表达减轻了低温弱光胁迫下PSII光抑制 | 第99页 |
·抑制LeZE的表达减轻了低温弱光胁迫下PSI光抑制 | 第99-100页 |
·抑制LeZE的表达对低温弱光胁迫下SOD和APX活性的影响 | 第100页 |
·抑制LeZE的表达对低温弱光胁迫下O_2~·和H_2O_2含量的影响 | 第100-101页 |
·抑制LeZE的表达对低温弱光胁迫下番茄叶片MDA含量的影响 | 第101-102页 |
·反义介导的LeZE的下调影响番茄成熟花花瓣的颜色 | 第102-103页 |
4 讨论 | 第103-110页 |
·LeZE 编码一种玉米黄质环氧化酶 | 第103-104页 |
·过量表达LeZE增加了强光和低温弱光胁迫下PSII光抑制的敏感性 | 第104-106页 |
·在强光下生长的转正义基因植株对强光的适应 | 第106-107页 |
·Z的大量积累不能改变过剩光能胁迫下的非光化学猝灭 | 第107-108页 |
·反义介导的LeZE的下调减轻低温弱光胁迫下番茄叶片光抑制 | 第108-110页 |
5 结论 | 第110-111页 |
参考文献 | 第111-128页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第128-129页 |
致谢 | 第129页 |