| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 前言: | 第10页 |
| 综述一 猪传染性胃肠炎病毒研究进展 | 第10-15页 |
| 1.TGEV病原学特征 | 第10页 |
| 2.TGEV分子生物学特征 | 第10-13页 |
| ·基因组结构 | 第10-11页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第11-13页 |
| ·非结构蛋白 | 第13页 |
| 3 猪传染性胃肠炎诊断技术研究进展 | 第13-15页 |
| ·病原学诊断技术 | 第13-14页 |
| ·血清学诊断技术 | 第14-15页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第15页 |
| 综述二 杂交瘤技术原理及单克隆抗体研究进展 | 第15-23页 |
| 1 杂交瘤技术原理 | 第15-17页 |
| 2 单克隆抗体研究进展 | 第17-21页 |
| ·免疫原研究进展 | 第17页 |
| ·免疫途径研究进展 | 第17-19页 |
| ·融合方法研究进展 | 第19-20页 |
| ·生产单克隆抗体的研究进展 | 第20页 |
| ·各种新的单克隆抗体 | 第20-21页 |
| 3 单克隆抗体在TGEV相关研究中的应用 | 第21-23页 |
| 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 试验研究 | 第24-58页 |
| 第一章 猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白的制备、纯化与鉴定 | 第24-39页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与毒株与实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂及配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·其它 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-28页 |
| ·TEGV N蛋白的表达 | 第25页 |
| ·TEGV N蛋白的纯化 | 第25-27页 |
| ·纯化TGEV重组N蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-35页 |
| ·重组N蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组N蛋白的纯化 | 第29-33页 |
| ·纯化的重组N蛋白的透析复性 | 第33页 |
| ·纯化重组N蛋白的免疫血清效价 | 第33-34页 |
| ·Western-blotting检测纯化蛋白活性 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·TGEV N蛋白作为诊断抗原的依据 | 第35-36页 |
| ·TGEV重组N蛋白亲和层析纯化方法的建立 | 第36-37页 |
| ·TGEV重组N蛋白在复性过程中出现的包涵体重聚现象 | 第37-38页 |
| ·纯化TGEV重组N蛋白的特异性 | 第38页 |
| 5 小结 | 第38-39页 |
| 第二章 TGEV重组N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第39-58页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| ·细胞与病毒 | 第39页 |
| ·TGEV重组N蛋白 | 第39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂及配制 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·其它 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-47页 |
| ·检测单克隆抗体的间接ELISA方法的建立 | 第40页 |
| ·免疫小鼠 | 第40-41页 |
| ·制备饲养细胞 | 第41页 |
| ·融合细胞的制备 | 第41-43页 |
| ·TGEV重组N蛋白免疫的小鼠脾细胞与SP2/O细胞的融合 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清中抗体的检测 | 第43-44页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第44页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养与冻存、复苏 | 第44-45页 |
| ·抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体的制备及效价测定 | 第45-46页 |
| ·抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体的纯化 | 第46页 |
| ·抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体的鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| ·检测单克隆抗体的间接ELISA方法的建立 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第48-50页 |
| ·单克隆抗体的制备及效价的测定 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体间接免疫荧光鉴定 | 第51-52页 |
| ·单克隆抗体交叉反应性鉴定 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性鉴定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·关于杂交瘤技术 | 第53-55页 |
| ·抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体的运用前景 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 第三部分 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
