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乙烯、脱落酸和AtMYB44在HrpNEa诱导植物生长与抗虫防卫信号传导过程中的作用

中文摘要第1-13页
ABSTRACT第13-16页
第一部分 文献综述第16-54页
 第一章 植物识别与传导harpin蛋白信号的机制第16-26页
  1 细菌产生Harpin蛋白的分子遗传学基础第17-19页
  2 Harpin在植物细胞中的作用位点第19-20页
  3 Harpin蛋白的构效关系的关系第20-22页
  4 Harpin启动植物防卫与生长激素信号传导第22-23页
  5 Harpin启动植物激素信号传导的交叉调控机制第23页
  6 Harpin启动氧化还原调控机制及对其他信号的交叉调控第23-24页
  7 有待研究的主要问题第24-26页
 第二章 植物乙烯和脱落酸信号传导通路第26-38页
  1 乙烯信号通路第26-32页
   ·乙烯信号传导第27-30页
     ·乙烯信号的接收第27-28页
     ·负调控因子CTR1第28-29页
     ·正调控因子EIN第29-30页
     ·转录调控因子ERF1第30页
   ·乙烯介导的植物防卫机制第30-32页
     ·乙烯介导的ISR信号通路第31页
     ·乙烯诱导的防卫反应第31-32页
  2 脱落酸(ABA)信号传导通路第32-37页
   ·脱落酸介导的信号传导第32-36页
     ·脱落酸信号的识别第33-34页
     ·脱落酸信号传导的调控因子第34-35页
     ·脱落酸信号传导中的转录调控第35-36页
   ·脱落酸介导的植物防卫机制第36-37页
  3 有待研究的主要问题第37-38页
 第三章 植物信号转录调控的分子基础:高等植物转录因子及其功能概述第38-46页
  1 高等植物转录因子的功能结构域第38-39页
   ·DNA结合域第38页
   ·转录调控域第38-39页
   ·寡聚化位点第39页
   ·核定位信号第39页
  2. 研究高等植物转录因子的方法第39-40页
   ·分离转录因子的常用方法第39-40页
   ·转录因子的瞬间表达分析第40页
   ·转录因子的功能突变分析第40页
  3 转录因子的分类与功能第40-45页
   ·bZIP类转录因子第41-42页
   ·AP2/EREBP类转录因子第42页
   ·WRKY类转录因子第42-44页
   ·MYB类转录因子第44-45页
  4 有待研究的主要问题第45-46页
 第四章 植物防卫信号通路交叉调控第46-54页
  1 植物激素信号传导之间的复杂关系第46-47页
  2 水杨酸与茉莉酸信号传导的交叉调控第47-48页
  3 乙烯与脱落酸信号传导的交叉调控第48-49页
  4 虫伤与信号通路的交叉对话第49-50页
  5 控制交叉对话的重要因子第50-53页
   ·NPR1第50-51页
   ·WRKY转录因子第51-52页
   ·谷氨酸还原酶GRX480第52页
   ·MPK4第52-53页
  6 有待研究的主要问题第53-54页
第二部分 研究报告第54-122页
 第一章 乙烯与脱落酸对HrpN_(Ea)诱导拟南芥抗蚜与抗旱的不同作用第54-64页
  摘要第54-56页
  1 材料与方法第56-57页
   ·植物材料和供试昆虫第56页
     ·植物材料第56页
     ·供试昆虫第56页
   ·HrpNEa制备第56页
   ·植物处理和诱导表型的测定第56页
   ·内源ABA和ET的测定和细胞与气孔的显微观察第56-57页
   ·药物抑制处理第57页
   ·数据处理与分析第57页
  2 结果与分析第57-62页
   ·ABA不影响HrpNEa激发的抗桃蚜应第57-58页
   ·乙烯不影响HrpNEa诱导的植物抗旱反应第58-62页
  3 讨论第62-63页
  4 总结第63-64页
 第二章 HrpN_(Ea)诱导拟南芥抗虫作用过程中的转录因子筛选第64-82页
  摘要第64-65页
  1. 材料与方法第65-73页
   ·植物处理与桃蚜饲养第65页
     ·植物处理第65页
     ·桃蚜处理第65页
   ·RT-PCR第65-68页
     ·总RNA提取和cDNA第一链的合成第65页
     ·PCR第65-68页
   ·Northern杂交第68-70页
     ·RNA变性电泳第68页
     ·将RNA从变性胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜第68-69页
     ·探针的制备第69页
       ·DNA模板的准备第69页
       ·地高辛标记的体外转录第69页
     ·预杂交第69页
     ·杂交第69页
     ·洗膜第69-70页
     ·检测第70页
     ·压片第70页
   ·实时定量RT-PCR第70-71页
     ·引物和扩增子设计第71页
     ·实验体系优化第71页
   ·突变体的获得第71页
   ·桃蚜饲养与趋避活动监测第71-73页
   ·突变体鉴定第73页
   ·洋葱表皮定位第73页
  2. 结果与分析第73-75页
   ·HrpNEa对野生型拟南芥相关转录因子基因的诱导表达第73-74页
   ·HrpNEa诱导野生型拟南芥但不诱导突变体的抗虫表型第74页
   ·HrpNEa诱导野生型拟南芥但不诱导突变体atmyb44表达AtMYB44第74页
   ·AtMYB44定位检测第74-75页
  3. 讨论第75-82页
 第三章 AtMYB44通过乙烯信号调控因子EIN2 #2控制拟南芥对桃蚜繁殖发生抗性反应第82-100页
  摘要第82-84页
  1. 材料与方法第84-89页
   ·植物和试虫的培养与处理第84-85页
     ·植物的培养与处理第84页
     ·试虫的培养与处理第84-85页
   ·凝胶迁移或电泳迁移率实验第85-87页
     ·探针的标记第85页
     ·核蛋白制备第85-86页
     ·非变性电泳第86-87页
   ·染色质免疫沉淀实验第87-89页
     ·染色质制备第87页
     ·免疫沉淀第87-88页
     ·免疫沉淀复合体的收集与纯化第88-89页
  2. 结果与分析第89-94页
   ·HrpNEa诱导拟南芥驱避桃蚜必需AtMYB44第89-90页
     ·化学或遗传阻断乙烯信号传导对桃蚜驱避和繁殖的影响第89-90页
     ·外源乙烯对AtMYB44的作用和对桃蚜驱避和繁殖的影响第90页
   ·EIN2诱导表达需要AtMYB44第90-92页
   ·HrpNEa诱导桃蚜驱避和繁殖需要EIN2第92-93页
   ·AtMYB44与EIN2互作第93-94页
     ·GMSA测定AtMYB44蛋白与EIN2启动子序列结合第93页
     ·ChIP-PCR测定AtMYB44蛋白与EIN2启动子序列的结合第93页
     ·GMSA测定HrpNEa处理Mgh/m后AtMYB44与EIN2启动子序列结合活性第93-94页
     ·桃蚜取食对AtMYB44与EIN2的影响和对桃蚜再次侵染的反应第94页
  3. 讨论第94-100页
 第四章 基因EIN2和ABI2共同调控激发子HrpNEa诱导的韧皮部防卫反应第100-122页
  摘要第100-101页
  1 材料与方法第101-107页
   ·植物与试虫的准备第101-102页
     ·植物的准备第101页
     ·试虫的准备第101-102页
   ·桃蚜取食活动的监测第102页
     ·桃蚜刺吸电信号的监测第102页
     ·罗丹明标记桃蚜取食活动第102页
     ·桃蚜的趋避处理第102页
   ·反转录PCR(RT-PCR)第102-103页
   ·原位杂交第103-106页
     ·植物组织准备第103-104页
     ·基因克隆第104页
     ·地高辛标记的体外转录第104-105页
     ·探针的水解第105页
     ·预杂交第105页
     ·杂交第105页
     ·杂交后处理步骤第105-106页
     ·免疫显色反应步骤第106页
   ·胼胝质化学发光实验第106页
   ·药物抑制实验第106页
   ·数据处理第106-107页
  2 结果与分析第107-120页
   ·HrpNEa诱导桃蚜的趋避第107-108页
   ·不同拟南芥野生型对桃蚜的天然趋避效应不同第108-112页
   ·HrpNEa诱导的桃蚜趋避作用需要EIN2和ABI2因子的协同作用第112-117页
     ·不同基因型对桃蚜趋避的影响第112-113页
     ·化学或遗传阻断ABA和乙烯信号传导对桃蚜趋避和繁殖的作用第113-116页
     ·乙烯和ABA信号传导途径共同作用于HrpNEa的诱导第116-117页
   ·桃蚜的取食活动与趋避效应的关系第117页
   ·EIN2/ABI2协同作用调节韧皮部防卫反应与桃蚜趋避诱导过程第117-120页
  3 讨论第120-122页
附录第122-126页
总结与展望第126-128页
参考文献第128-148页
缩略语第148-152页
攻读博士学位期间发表和完成的学术论文目录第152-154页
致谢第154页

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