中文摘要 | 第1-13页 |
ABSTRACT | 第13-16页 |
第一部分 文献综述 | 第16-54页 |
第一章 植物识别与传导harpin蛋白信号的机制 | 第16-26页 |
1 细菌产生Harpin蛋白的分子遗传学基础 | 第17-19页 |
2 Harpin在植物细胞中的作用位点 | 第19-20页 |
3 Harpin蛋白的构效关系的关系 | 第20-22页 |
4 Harpin启动植物防卫与生长激素信号传导 | 第22-23页 |
5 Harpin启动植物激素信号传导的交叉调控机制 | 第23页 |
6 Harpin启动氧化还原调控机制及对其他信号的交叉调控 | 第23-24页 |
7 有待研究的主要问题 | 第24-26页 |
第二章 植物乙烯和脱落酸信号传导通路 | 第26-38页 |
1 乙烯信号通路 | 第26-32页 |
·乙烯信号传导 | 第27-30页 |
·乙烯信号的接收 | 第27-28页 |
·负调控因子CTR1 | 第28-29页 |
·正调控因子EIN | 第29-30页 |
·转录调控因子ERF1 | 第30页 |
·乙烯介导的植物防卫机制 | 第30-32页 |
·乙烯介导的ISR信号通路 | 第31页 |
·乙烯诱导的防卫反应 | 第31-32页 |
2 脱落酸(ABA)信号传导通路 | 第32-37页 |
·脱落酸介导的信号传导 | 第32-36页 |
·脱落酸信号的识别 | 第33-34页 |
·脱落酸信号传导的调控因子 | 第34-35页 |
·脱落酸信号传导中的转录调控 | 第35-36页 |
·脱落酸介导的植物防卫机制 | 第36-37页 |
3 有待研究的主要问题 | 第37-38页 |
第三章 植物信号转录调控的分子基础:高等植物转录因子及其功能概述 | 第38-46页 |
1 高等植物转录因子的功能结构域 | 第38-39页 |
·DNA结合域 | 第38页 |
·转录调控域 | 第38-39页 |
·寡聚化位点 | 第39页 |
·核定位信号 | 第39页 |
2. 研究高等植物转录因子的方法 | 第39-40页 |
·分离转录因子的常用方法 | 第39-40页 |
·转录因子的瞬间表达分析 | 第40页 |
·转录因子的功能突变分析 | 第40页 |
3 转录因子的分类与功能 | 第40-45页 |
·bZIP类转录因子 | 第41-42页 |
·AP2/EREBP类转录因子 | 第42页 |
·WRKY类转录因子 | 第42-44页 |
·MYB类转录因子 | 第44-45页 |
4 有待研究的主要问题 | 第45-46页 |
第四章 植物防卫信号通路交叉调控 | 第46-54页 |
1 植物激素信号传导之间的复杂关系 | 第46-47页 |
2 水杨酸与茉莉酸信号传导的交叉调控 | 第47-48页 |
3 乙烯与脱落酸信号传导的交叉调控 | 第48-49页 |
4 虫伤与信号通路的交叉对话 | 第49-50页 |
5 控制交叉对话的重要因子 | 第50-53页 |
·NPR1 | 第50-51页 |
·WRKY转录因子 | 第51-52页 |
·谷氨酸还原酶GRX480 | 第52页 |
·MPK4 | 第52-53页 |
6 有待研究的主要问题 | 第53-54页 |
第二部分 研究报告 | 第54-122页 |
第一章 乙烯与脱落酸对HrpN_(Ea)诱导拟南芥抗蚜与抗旱的不同作用 | 第54-64页 |
摘要 | 第54-56页 |
1 材料与方法 | 第56-57页 |
·植物材料和供试昆虫 | 第56页 |
·植物材料 | 第56页 |
·供试昆虫 | 第56页 |
·HrpNEa制备 | 第56页 |
·植物处理和诱导表型的测定 | 第56页 |
·内源ABA和ET的测定和细胞与气孔的显微观察 | 第56-57页 |
·药物抑制处理 | 第57页 |
·数据处理与分析 | 第57页 |
2 结果与分析 | 第57-62页 |
·ABA不影响HrpNEa激发的抗桃蚜应 | 第57-58页 |
·乙烯不影响HrpNEa诱导的植物抗旱反应 | 第58-62页 |
3 讨论 | 第62-63页 |
4 总结 | 第63-64页 |
第二章 HrpN_(Ea)诱导拟南芥抗虫作用过程中的转录因子筛选 | 第64-82页 |
摘要 | 第64-65页 |
1. 材料与方法 | 第65-73页 |
·植物处理与桃蚜饲养 | 第65页 |
·植物处理 | 第65页 |
·桃蚜处理 | 第65页 |
·RT-PCR | 第65-68页 |
·总RNA提取和cDNA第一链的合成 | 第65页 |
·PCR | 第65-68页 |
·Northern杂交 | 第68-70页 |
·RNA变性电泳 | 第68页 |
·将RNA从变性胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜 | 第68-69页 |
·探针的制备 | 第69页 |
·DNA模板的准备 | 第69页 |
·地高辛标记的体外转录 | 第69页 |
·预杂交 | 第69页 |
·杂交 | 第69页 |
·洗膜 | 第69-70页 |
·检测 | 第70页 |
·压片 | 第70页 |
·实时定量RT-PCR | 第70-71页 |
·引物和扩增子设计 | 第71页 |
·实验体系优化 | 第71页 |
·突变体的获得 | 第71页 |
·桃蚜饲养与趋避活动监测 | 第71-73页 |
·突变体鉴定 | 第73页 |
·洋葱表皮定位 | 第73页 |
2. 结果与分析 | 第73-75页 |
·HrpNEa对野生型拟南芥相关转录因子基因的诱导表达 | 第73-74页 |
·HrpNEa诱导野生型拟南芥但不诱导突变体的抗虫表型 | 第74页 |
·HrpNEa诱导野生型拟南芥但不诱导突变体atmyb44表达AtMYB44 | 第74页 |
·AtMYB44定位检测 | 第74-75页 |
3. 讨论 | 第75-82页 |
第三章 AtMYB44通过乙烯信号调控因子EIN2 #2控制拟南芥对桃蚜繁殖发生抗性反应 | 第82-100页 |
摘要 | 第82-84页 |
1. 材料与方法 | 第84-89页 |
·植物和试虫的培养与处理 | 第84-85页 |
·植物的培养与处理 | 第84页 |
·试虫的培养与处理 | 第84-85页 |
·凝胶迁移或电泳迁移率实验 | 第85-87页 |
·探针的标记 | 第85页 |
·核蛋白制备 | 第85-86页 |
·非变性电泳 | 第86-87页 |
·染色质免疫沉淀实验 | 第87-89页 |
·染色质制备 | 第87页 |
·免疫沉淀 | 第87-88页 |
·免疫沉淀复合体的收集与纯化 | 第88-89页 |
2. 结果与分析 | 第89-94页 |
·HrpNEa诱导拟南芥驱避桃蚜必需AtMYB44 | 第89-90页 |
·化学或遗传阻断乙烯信号传导对桃蚜驱避和繁殖的影响 | 第89-90页 |
·外源乙烯对AtMYB44的作用和对桃蚜驱避和繁殖的影响 | 第90页 |
·EIN2诱导表达需要AtMYB44 | 第90-92页 |
·HrpNEa诱导桃蚜驱避和繁殖需要EIN2 | 第92-93页 |
·AtMYB44与EIN2互作 | 第93-94页 |
·GMSA测定AtMYB44蛋白与EIN2启动子序列结合 | 第93页 |
·ChIP-PCR测定AtMYB44蛋白与EIN2启动子序列的结合 | 第93页 |
·GMSA测定HrpNEa处理Mgh/m后AtMYB44与EIN2启动子序列结合活性 | 第93-94页 |
·桃蚜取食对AtMYB44与EIN2的影响和对桃蚜再次侵染的反应 | 第94页 |
3. 讨论 | 第94-100页 |
第四章 基因EIN2和ABI2共同调控激发子HrpNEa诱导的韧皮部防卫反应 | 第100-122页 |
摘要 | 第100-101页 |
1 材料与方法 | 第101-107页 |
·植物与试虫的准备 | 第101-102页 |
·植物的准备 | 第101页 |
·试虫的准备 | 第101-102页 |
·桃蚜取食活动的监测 | 第102页 |
·桃蚜刺吸电信号的监测 | 第102页 |
·罗丹明标记桃蚜取食活动 | 第102页 |
·桃蚜的趋避处理 | 第102页 |
·反转录PCR(RT-PCR) | 第102-103页 |
·原位杂交 | 第103-106页 |
·植物组织准备 | 第103-104页 |
·基因克隆 | 第104页 |
·地高辛标记的体外转录 | 第104-105页 |
·探针的水解 | 第105页 |
·预杂交 | 第105页 |
·杂交 | 第105页 |
·杂交后处理步骤 | 第105-106页 |
·免疫显色反应步骤 | 第106页 |
·胼胝质化学发光实验 | 第106页 |
·药物抑制实验 | 第106页 |
·数据处理 | 第106-107页 |
2 结果与分析 | 第107-120页 |
·HrpNEa诱导桃蚜的趋避 | 第107-108页 |
·不同拟南芥野生型对桃蚜的天然趋避效应不同 | 第108-112页 |
·HrpNEa诱导的桃蚜趋避作用需要EIN2和ABI2因子的协同作用 | 第112-117页 |
·不同基因型对桃蚜趋避的影响 | 第112-113页 |
·化学或遗传阻断ABA和乙烯信号传导对桃蚜趋避和繁殖的作用 | 第113-116页 |
·乙烯和ABA信号传导途径共同作用于HrpNEa的诱导 | 第116-117页 |
·桃蚜的取食活动与趋避效应的关系 | 第117页 |
·EIN2/ABI2协同作用调节韧皮部防卫反应与桃蚜趋避诱导过程 | 第117-120页 |
3 讨论 | 第120-122页 |
附录 | 第122-126页 |
总结与展望 | 第126-128页 |
参考文献 | 第128-148页 |
缩略语 | 第148-152页 |
攻读博士学位期间发表和完成的学术论文目录 | 第152-154页 |
致谢 | 第154页 |