摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-11页 |
第一章 口蹄疫研究进展概况 | 第11-26页 |
·口蹄疫现况概述 | 第11-12页 |
·口蹄疫病毒分子生物学研究概况及VP1 基因研究进展 | 第12-17页 |
·口蹄疫病毒分子生物学研究概况 | 第12-15页 |
·口蹄疫病毒VP1 基因研究进展 | 第15-17页 |
·口蹄疫疫苗研究进展 | 第17-22页 |
·传统疫苗 | 第17-18页 |
·新型疫苗 | 第18-21页 |
·口蹄疫免疫失败的原因 | 第21-22页 |
·口蹄疫检测技术研究进展 | 第22-25页 |
·病毒分离 | 第22页 |
·血清学检测技术 | 第22-23页 |
·新型诊断技术 | 第23-24页 |
·口蹄疫灭活疫苗检测技术 | 第24-25页 |
·展望 | 第25-26页 |
第二章 O 型口蹄疫制苗毒株 VP1 基因的序列分析 | 第26-41页 |
·材料 | 第26-27页 |
·病毒 | 第26页 |
·菌株与载体 | 第26页 |
·主要试剂 | 第26页 |
·主要仪器 | 第26-27页 |
·引物的设计与合成 | 第27页 |
·试验方法 | 第27-34页 |
·口蹄疫病毒的获取 | 第27页 |
·病毒RNA 的提取 | 第27-28页 |
·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR) | 第28-29页 |
·PCR 产物的回收纯化 | 第29-30页 |
·PCR 产物与pGEM-T Easy 载体的连接 | 第30页 |
·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
·连接产物的转化 | 第31页 |
·阳性克隆的筛选 | 第31页 |
·重组质粒的提取 | 第31-32页 |
·重组质粒的PCR 鉴定 | 第32-33页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
·质粒DNA 测序 | 第33页 |
·VP1 基因序列分析 | 第33-34页 |
·结果 | 第34-39页 |
·FMDV 的培养 | 第34页 |
·病毒RNA 提取结果 | 第34页 |
·口蹄疫细胞毒RT-PCR 特异性引物的选择 | 第34-35页 |
·VP1 基因的克隆及PCR 鉴定 | 第35页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
·核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较 | 第36-37页 |
·核苷酸系统发生树分析 | 第37-38页 |
·主要氨基酸位点的变异情况 | 第38-39页 |
·各毒株之间VP1 结构蛋白的抗原位点分析 | 第39页 |
·讨论 | 第39-41页 |
第三章 灭活疫苗中 VP1 基因抽提方法的建立 | 第41-51页 |
·材料 | 第41-42页 |
·病毒 | 第41页 |
·载体及菌种 | 第41页 |
·主要试剂 | 第41页 |
·主要仪器 | 第41-42页 |
·引物的设计与合成 | 第42页 |
·试验方法 | 第42-47页 |
·病毒培养 | 第42页 |
·口蹄疫病毒的BEI 灭活 | 第42-43页 |
·RNA 提取 | 第43页 |
·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR) | 第43页 |
·PCR 产物的回收纯化 | 第43-44页 |
·目的DNA 的快速连接 | 第44页 |
·感受态细胞的制备与连接产物的转化 | 第44-45页 |
·阳性克隆的筛选 | 第45页 |
·重组质粒的提取 | 第45-46页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第46页 |
·重组质粒的PCR 鉴定 | 第46页 |
·目的基因的核苷酸序列测定 | 第46-47页 |
·结果 | 第47-49页 |
·口蹄疫病毒BEI 灭活检测 | 第47页 |
·疫苗病毒抗原的分离 | 第47页 |
·对疫苗中不同方法提取的灭活抗原进行RT-PCR 检测 | 第47-48页 |
·RT-PCR 检测 | 第48页 |
·阳性克隆的鉴定 | 第48-49页 |
·序列分析 | 第49页 |
·讨论 | 第49-51页 |
第四章 不同厂家的口蹄疫灭活疫苗中 VP1 基因分析 | 第51-60页 |
·材料 | 第51-52页 |
·疫苗来源 | 第51页 |
·载体及菌种 | 第51页 |
·主要试剂 | 第51页 |
·主要仪器 | 第51-52页 |
·引物的设计与合成 | 第52页 |
·试验方法 | 第52-53页 |
·疫苗毒株的RNA 提取 | 第52页 |
·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR) | 第52页 |
·PCR 产物的纯化回收、连接及转化 | 第52-53页 |
·重组质粒的提取及鉴定 | 第53页 |
·目的基因的核苷酸序列测定 | 第53页 |
·结果 | 第53-57页 |
·疫苗病毒抗原的分离 | 第53-54页 |
·对疫苗中灭活抗原的RT-PCR 检测 | 第54页 |
·阳性克隆的酶切及PCR 鉴定 | 第54-55页 |
·三厂家间分离株的VP1 基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较 | 第55-56页 |
·核苷酸系统发生树分析 | 第56-57页 |
·主要氨基酸位点的变异情况 | 第57页 |
·讨论 | 第57-60页 |
全文结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-67页 |
附录 | 第67-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
作者简介 | 第71页 |