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口蹄疫灭活疫苗中VP1基因分析方法的建立及应用

摘要第1-4页
Abstract第4-11页
第一章 口蹄疫研究进展概况第11-26页
   ·口蹄疫现况概述第11-12页
   ·口蹄疫病毒分子生物学研究概况及VP1 基因研究进展第12-17页
     ·口蹄疫病毒分子生物学研究概况第12-15页
     ·口蹄疫病毒VP1 基因研究进展第15-17页
   ·口蹄疫疫苗研究进展第17-22页
     ·传统疫苗第17-18页
     ·新型疫苗第18-21页
     ·口蹄疫免疫失败的原因第21-22页
   ·口蹄疫检测技术研究进展第22-25页
     ·病毒分离第22页
     ·血清学检测技术第22-23页
     ·新型诊断技术第23-24页
     ·口蹄疫灭活疫苗检测技术第24-25页
   ·展望第25-26页
第二章 O 型口蹄疫制苗毒株 VP1 基因的序列分析第26-41页
   ·材料第26-27页
     ·病毒第26页
     ·菌株与载体第26页
     ·主要试剂第26页
     ·主要仪器第26-27页
     ·引物的设计与合成第27页
   ·试验方法第27-34页
     ·口蹄疫病毒的获取第27页
     ·病毒RNA 的提取第27-28页
     ·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR)第28-29页
     ·PCR 产物的回收纯化第29-30页
     ·PCR 产物与pGEM-T Easy 载体的连接第30页
     ·感受态细胞的制备第30-31页
     ·连接产物的转化第31页
     ·阳性克隆的筛选第31页
     ·重组质粒的提取第31-32页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第32-33页
     ·重组质粒的酶切鉴定第33页
     ·质粒DNA 测序第33页
     ·VP1 基因序列分析第33-34页
   ·结果第34-39页
     ·FMDV 的培养第34页
     ·病毒RNA 提取结果第34页
     ·口蹄疫细胞毒RT-PCR 特异性引物的选择第34-35页
     ·VP1 基因的克隆及PCR 鉴定第35页
     ·重组质粒的酶切鉴定第35-36页
     ·核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较第36-37页
     ·核苷酸系统发生树分析第37-38页
     ·主要氨基酸位点的变异情况第38-39页
     ·各毒株之间VP1 结构蛋白的抗原位点分析第39页
   ·讨论第39-41页
第三章 灭活疫苗中 VP1 基因抽提方法的建立第41-51页
   ·材料第41-42页
     ·病毒第41页
     ·载体及菌种第41页
     ·主要试剂第41页
     ·主要仪器第41-42页
     ·引物的设计与合成第42页
   ·试验方法第42-47页
     ·病毒培养第42页
     ·口蹄疫病毒的BEI 灭活第42-43页
     ·RNA 提取第43页
     ·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR)第43页
     ·PCR 产物的回收纯化第43-44页
     ·目的DNA 的快速连接第44页
     ·感受态细胞的制备与连接产物的转化第44-45页
     ·阳性克隆的筛选第45页
     ·重组质粒的提取第45-46页
     ·重组质粒的酶切鉴定第46页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第46页
     ·目的基因的核苷酸序列测定第46-47页
   ·结果第47-49页
     ·口蹄疫病毒BEI 灭活检测第47页
     ·疫苗病毒抗原的分离第47页
     ·对疫苗中不同方法提取的灭活抗原进行RT-PCR 检测第47-48页
     ·RT-PCR 检测第48页
     ·阳性克隆的鉴定第48-49页
     ·序列分析第49页
   ·讨论第49-51页
第四章 不同厂家的口蹄疫灭活疫苗中 VP1 基因分析第51-60页
   ·材料第51-52页
     ·疫苗来源第51页
     ·载体及菌种第51页
     ·主要试剂第51页
     ·主要仪器第51-52页
     ·引物的设计与合成第52页
   ·试验方法第52-53页
     ·疫苗毒株的RNA 提取第52页
     ·反转录及cDNA 的聚合酶链式扩增(RT-PCR)第52页
     ·PCR 产物的纯化回收、连接及转化第52-53页
     ·重组质粒的提取及鉴定第53页
     ·目的基因的核苷酸序列测定第53页
   ·结果第53-57页
     ·疫苗病毒抗原的分离第53-54页
     ·对疫苗中灭活抗原的RT-PCR 检测第54页
     ·阳性克隆的酶切及PCR 鉴定第54-55页
     ·三厂家间分离株的VP1 基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较第55-56页
     ·核苷酸系统发生树分析第56-57页
     ·主要氨基酸位点的变异情况第57页
   ·讨论第57-60页
全文结论第60-61页
参考文献第61-67页
附录第67-70页
致谢第70-71页
作者简介第71页

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