| 摘要 | 第5-6页 |
| Summary | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1.1 马铃薯和马铃薯产业概况 | 第10-11页 |
| 1.2 果蔬褐变发生机理的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.1 酶促褐变的机理假说 | 第11-12页 |
| 1.3 酶促褐变的发生条件 | 第12-13页 |
| 1.3.1 酚类物质 | 第13页 |
| 1.3.2 酶 | 第13页 |
| 1.3.3 氧气 | 第13页 |
| 1.4 多酚氧化酶研究现状 | 第13-18页 |
| 1.4.1 多酚氧化酶的特性 | 第13-14页 |
| 1.4.2 多酚氧化酶的生成和存在形式 | 第14-15页 |
| 1.4.3 PPO同源性研究 | 第15页 |
| 1.4.4 多酚氧化酶的分子生物学研究 | 第15-16页 |
| 1.4.5 多酚氧化酶活性的抑制研究 | 第16-18页 |
| 1.5 基因组编辑技术研究现状 | 第18-24页 |
| 1.5.1 锌指核酸酶(ZFNs)基本结构和作用原理 | 第19-20页 |
| 1.5.2 类转录激活因子效应物核酸酶基本结构和作用原理 | 第20页 |
| 1.5.3 CRISPR/Cas系统基本结构和作用原理 | 第20-22页 |
| 1.5.4 ZFNs、TALENs、CRISPR/Cas技术的比较 | 第22页 |
| 1.5.5 CRISPR/Cas9技术在植物中的应用 | 第22-24页 |
| 1.6 本文研究内容、技术路线和目的意义 | 第24-26页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第24页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第24页 |
| 1.6.3 目的意义 | 第24-26页 |
| 第二章 应用CRISPR/Cas9技术对马铃薯PPO抑制研究 | 第26-52页 |
| 1.1 前言 | 第26-27页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第27-31页 |
| 1.2.1 供试材料 | 第27页 |
| 1.2.2 试剂及仪器 | 第27-28页 |
| 1.2.3 主要溶液与培养基配制 | 第28-31页 |
| 1.3 实验方法 | 第31-42页 |
| 1.3.1 设计基因靶点及载体的构建 | 第31页 |
| 1.3.2 载体验证 | 第31页 |
| 1.3.3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| 1.3.4 大肠杆菌的DNA转化 | 第32页 |
| 1.3.5 质粒DNA提取 | 第32-33页 |
| 1.3.6 农杆菌感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| 1.3.7 农杆菌的DNA转化 | 第34页 |
| 1.3.8 农杆菌菌液PCR鉴定 | 第34-36页 |
| 1.3.9 菌种保存 | 第36页 |
| 1.3.10 马铃薯无菌体系 | 第36页 |
| 1.3.11 遗传转化 | 第36-37页 |
| 1.3.12 马铃薯的炼苗与移栽 | 第37页 |
| 1.3.13 植物基因组DNA的提取及阳性株鉴定 | 第37-39页 |
| 1.3.14 测序检测阳性转化株突变位点 | 第39-41页 |
| 1.3.15 马铃薯块茎的PPO酶活力相关测定 | 第41-42页 |
| 1.3.16 统计分析 | 第42页 |
| 1.4 结果与分析 | 第42-50页 |
| 1.4.1 基因靶点序列以及载体构建 | 第42页 |
| 1.4.2 载体验证 | 第42-45页 |
| 1.4.3 马铃薯的遗传转化 | 第45页 |
| 1.4.4 植物基因组DNA的提取及阳性株鉴定 | 第45-46页 |
| 1.4.5 测序检测阳性株 | 第46-47页 |
| 1.4.6 转基因马铃薯块茎的PPO酶活力相关测定 | 第47-50页 |
| 1.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 结论、创新与展望 | 第52-53页 |
| 1.1 结论 | 第52页 |
| 1.2 创新 | 第52页 |
| 1.3 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
