| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 维生素B6简介及其在生物体内的作用 | 第11页 |
| 1.2 VB6的生物合成 | 第11-13页 |
| 1.3 生物体内VB6的代谢转换 | 第13-14页 |
| 1.4 PLK的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.4.1 PLK的催化功能和结构特点 | 第14-17页 |
| 1.4.2 植物PLK的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 PNPO的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.5.1 PNPO的催化功能和结构特点 | 第18-21页 |
| 1.5.2 植物PNPO的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.6 RNAi简介 | 第22-24页 |
| 2 引言 | 第24-25页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第24页 |
| 2.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-38页 |
| 3.1 实验材料、主要试剂和设备 | 第25-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 实验设备 | 第25页 |
| 3.1.3 主要试剂及配方 | 第25-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 3.2.1 烟草NtPLK、NtPNPO基因的生物信息学分析 | 第27页 |
| 3.2.2 NtPLK、NtPNPO目的片段的克隆 | 第27-30页 |
| 3.2.3 NtPLK、NtPNPO原核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 3.2.4 表达菌株的诱导表达和表达产物的SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| 3.2.5 NtPLK、NtPNPO的酶活测定 | 第33-34页 |
| 3.2.6 NtPLK、NtPNPORNAi载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.7 农杆菌侵染烟草叶片 | 第35-36页 |
| 3.2.8 荧光定量检测 | 第36-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-51页 |
| 4.1 烟草PL激酶、PNP氧化酶基因的克隆 | 第38-43页 |
| 4.1.1 烟草NtPLK和NtPNPOcDNA序列的分析预测 | 第38页 |
| 4.1.2 RNA检测结果 | 第38页 |
| 4.1.3 PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| 4.1.4 NtPLK和NtPNPO的克隆与测序结果 | 第39-40页 |
| 4.1.5 NtPLK与NtPNPO基因结构 | 第40-41页 |
| 4.1.6 PLK与PNPO多序列比对 | 第41-43页 |
| 4.2 NtPLK和NtPNPO的原核表达 | 第43-45页 |
| 4.3 NtPLK与NtPNPO活性测定 | 第45页 |
| 4.4 NtPLK和NtPNPO组织表达差异性分析 | 第45-46页 |
| 4.5 NtPLK和NtPNPORNAi载体的构建 | 第46-48页 |
| 4.5.1 RNAi载体构建图谱 | 第46页 |
| 4.5.2 干扰片段的PCR扩增 | 第46-48页 |
| 4.5.3 NtPLK和NtPNPORNAi重组质粒的构建和鉴定 | 第48页 |
| 4.6 NtPLK和NtPNPORNAi载体沉默效果的检测 | 第48-51页 |
| 4.6.1 RNAi有效时间的检测 | 第48-49页 |
| 4.6.2 NtPLK和NtPNPORNAi对其它VB6合成和代谢转换酶基因表达的影响 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1 NtPLK和NtPNPO基因和相应编码蛋白的结构特点分析 | 第51页 |
| 5.2 NtPLK和NtPNPO在不同组织中转录表达水平的分析 | 第51-52页 |
| 5.3 NtPLK和NtPNPO基因RNAi效果 | 第52页 |
| 5.4 NtPLK和NtPNPORNAi对其它VB6合成和代谢转换酶基因表达的影响 | 第52-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
