| 摘要 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1 胫骨软骨发育不良 | 第11-15页 |
| 1.1 正常生长板软骨发育 | 第11-12页 |
| 1.2 胫骨软骨发育不良的特征 | 第12-13页 |
| 1.3 胫骨软骨发育不良的病因 | 第13-14页 |
| 1.3.1 遗传选育 | 第13页 |
| 1.3.2 饲养管理 | 第13页 |
| 1.3.3 环境因素 | 第13页 |
| 1.3.4 日粮成分 | 第13-14页 |
| 1.3.5 局部因子 | 第14页 |
| 1.3.6 生长板的血管 | 第14页 |
| 1.3.7 福美双诱导 | 第14页 |
| 1.4 胫骨软骨发育不良的最新研究进展 | 第14-15页 |
| 2 脂肪酸结合蛋白(FABPS)的研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1 FABPs的分布 | 第15-16页 |
| 2.2 FABPs的结构 | 第16-17页 |
| 2.3 FABPs的生物学功能 | 第17页 |
| 3 细胞外脂肪酸结合蛋白(EX-FABP)的研究进展 | 第17-20页 |
| 3.1 Ex-FABP的分布 | 第17-18页 |
| 3.2 Ex-FABP的基因结构 | 第18-19页 |
| 3.3 Ex-FABP的功能 | 第19页 |
| 3.4 Ex-FABP具有抗菌活性 | 第19-20页 |
| 3.5 Ex-FABP与胫骨软骨发育不良 | 第20页 |
| 4 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 试验一 EX-FABP重组表达载体的构建 | 第21-37页 |
| 1 试验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 试验试剂 | 第21页 |
| 1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 1.3 主要溶液的配置 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-29页 |
| 2.1 Ex-FABP的引物设计 | 第22页 |
| 2.2 Ex-FABP目的基因的获得与扩增 | 第22-25页 |
| 2.2.1 提取鸡胫骨软骨生长板组织总RNA | 第23页 |
| 2.2.2 反转录合成cDNA | 第23-25页 |
| 2.3 Ex-FABP重组克隆载体的构建与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.3.1 目的基因片段与克隆载体的连接 | 第25页 |
| 2.3.2 重组克隆载体的转化 | 第25-27页 |
| 2.4 Ex-FABP重组表达载体的构建与鉴定 | 第27-29页 |
| 3 试验结果 | 第29-35页 |
| 3.1 鸡胫骨软骨生长板总RNA鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2 目的基因PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| 3.3 重组克隆质粒的鉴定结果 | 第31-33页 |
| 3.3.1 菌液PCR鉴定 | 第31页 |
| 3.3.2 双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.3 序列鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 重组表达质粒的鉴定结果 | 第33-35页 |
| 3.4.1 菌液PCR鉴定 | 第33页 |
| 3.4.2 双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4.3 序列鉴定 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 目的基因Ex-FABP的获得 | 第35页 |
| 4.2 原核表达载体的选择 | 第35-36页 |
| 4.3 Ex-FABP重组表达质粒的构建和鉴定 | 第36-37页 |
| 试验二 EX-FABP重组蛋白的原核表达、纯化和鉴定 | 第37-51页 |
| 1 试验材料 | 第37-39页 |
| 1.1 实验试剂 | 第37页 |
| 1.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-43页 |
| 2.1 重组表达质粒的转化 | 第39页 |
| 2.2 诱导表达 | 第39页 |
| 2.3 诱导表达条件的优化 | 第39-40页 |
| 2.3.1 最适IPTG诱导浓度的确定 | 第39-40页 |
| 2.3.2 最适诱导温度的确定 | 第40页 |
| 2.3.3 最适诱导时间的确定 | 第40页 |
| 2.4 表达产物的纯化 | 第40-41页 |
| 2.4.1 Ex-FABP重组蛋白的大量诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.4.2 Ex-FABP重组蛋白的纯化 | 第41页 |
| 2.5 Ex-FABP重组蛋白的鉴定 | 第41-43页 |
| 2.5.1 SDS-PAGE电泳鉴定 | 第41-42页 |
| 2.5.2 Western Blot检测 | 第42-43页 |
| 3 试验结果 | 第43-48页 |
| 3.1 Ex-FABP重组蛋白的表达和形式鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.1 Ex-FABP重组蛋白的表达结果 | 第43页 |
| 3.1.2 Ex-FABP重组蛋白的形式鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.2 Ex-FABP重组蛋白的最佳表达条件的探索 | 第44-46页 |
| 3.2.1 最适IPTG诱导剂量的确定 | 第44-45页 |
| 3.2.3 最适诱导温度的确定 | 第45-46页 |
| 3.2.3 最适诱导时间的确定 | 第46页 |
| 3.3 Ex-FABP重组蛋白的纯化结果 | 第46-48页 |
| 3.4 Ex-FABP重组蛋白的免疫印迹鉴定结果 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 表达宿主菌的选择 | 第48-49页 |
| 4.2 最适表达条件的优化 | 第49页 |
| 4.3 Ex-FABP重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 4.4 后续试验 | 第50-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| Abstract | 第58-59页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
