| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 背景概况 | 第11页 |
| 1.2 托品烷生物碱及多胺合成途径的研究进展 | 第11-17页 |
| 1.2.1 托品烷生物碱合成途径的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.2 多胺生物合成途径的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3 pmt的研究进展 | 第17-19页 |
| 第2章 绪论 | 第19-21页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 第3章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第21-23页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第21页 |
| 3.1.3 试剂及试剂购买 | 第21页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第21-22页 |
| 3.1.5 常规试剂 | 第22-23页 |
| 3.2 常规方法和操作步骤 | 第23-28页 |
| 3.2.1 rna提取与测定 | 第23页 |
| 3.2.2 rna反转录形成cdna | 第23-24页 |
| 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| 3.2.4 dna产物的纯化与回收 | 第24-25页 |
| 3.2.5 连接反应 | 第25页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备(dh5α和rosetta) | 第25-26页 |
| 3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 3.2.8 重组子的鉴定测序 | 第26页 |
| 3.2.9 重组质粒的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.10 农杆菌(gv3101)感受态的制备 | 第27页 |
| 3.2.11 农杆菌(gv3101)感受态细胞的转化 | 第27-28页 |
| 3.2.12 荧光定量pcr | 第28页 |
| 3.3 莨菪pmt基因的克隆与分析 | 第28-29页 |
| 3.3.1 莨菪根部总rna提取及合成第一链cdna | 第28页 |
| 3.3.2 hnpmt基因的克隆 | 第28-29页 |
| 3.3.3 hnpmt基因的生物信息学分析 | 第29页 |
| 3.4 hnpmt表达模式分析 | 第29-30页 |
| 3.4.1 hnpmt组织表达分析 | 第29-30页 |
| 3.4.2 hnpmt的meja诱导表达分析 | 第30页 |
| 3.5 hnpmt基因的原核表达分析 | 第30-34页 |
| 3.5.1 hnpmt基因原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.5.2 hnpmt重组蛋白的时间梯度诱导 | 第31-32页 |
| 3.5.3 hnpmt重组蛋白的大量诱导及纯化 | 第32-33页 |
| 3.5.4 透析袋的处理及蛋白透析去盐 | 第33页 |
| 3.5.5 测定蛋白浓度(brandford法) | 第33-34页 |
| 3.6 hnpmt重组蛋白酶活性的鉴定及酶动力学分析 | 第34-35页 |
| 3.6.1 hnpmt重组蛋白酶活性的鉴定 | 第34页 |
| 3.6.2 hnpmt重组蛋白酶活ph、温度梯度绘制 | 第34-35页 |
| 3.6.3 hnpmt重组蛋白酶动力学绘制 | 第35页 |
| 3.7 vigs干扰hnpmt实验 | 第35-39页 |
| 3.7.1 hnpmt病毒沉默载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.7.2 莨菪vigs实验 | 第36页 |
| 3.7.3 干扰植株游离态多胺的测定 | 第36页 |
| 3.7.4 干扰植株生物碱的测定 | 第36-39页 |
| 第4章 结果与分析 | 第39-53页 |
| 4.1 hnpmt基因cdna的获得与分析 | 第39页 |
| 4.2 hnpmt的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 4.2.1 pmt序列的多重比对 | 第39-40页 |
| 4.2.2 pmt的分子进化树的构建 | 第40-41页 |
| 4.3 hnpmt表达模式分析 | 第41-42页 |
| 4.3.1 hnpmt组织表达和meja诱导表达分析 | 第41-42页 |
| 4.4 hnpmt蛋白质的重组与纯化 | 第42-46页 |
| 4.4.1 hnpmt原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.4.2 hnpmt重组蛋白的纯化及活性鉴定 | 第43-44页 |
| 4.4.3 hnpmt催化反应的最适ph和温度 | 第44-45页 |
| 4.4.4 hnpmt的酶动力学研究 | 第45-46页 |
| 4.5 vigs法沉默hnpmt对tas和多胺生物合成的影响 | 第46-49页 |
| 4.5.1 vigs实验 | 第46-48页 |
| 4.5.2 干扰莨菪植株hnpmt基因表达量、n-甲基腐胺和tas的测定 | 第48页 |
| 4.5.3 干扰莨菪植株hnpmt游离态多胺的测定 | 第48-49页 |
| 4.6 讨论 | 第49-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 5.1 结论 | 第53页 |
| 5.2 展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 缩写词表 | 第61-63页 |
| 硕士期间发表论文 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
