| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第8-26页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌的致病性 | 第8-9页 |
| 1.2 群集感应系统 | 第9-13页 |
| 1.2.1 群集感应系统的组分 | 第9-10页 |
| 1.2.2 群体感应系统之间的关系 | 第10-12页 |
| 1.2.3 群体感应系统和多种毒性因子的形成有关 | 第12-13页 |
| 1.3 生物膜 | 第13-16页 |
| 1.3.1 生物膜的存在形式 | 第13-14页 |
| 1.3.2 生物膜时间上的发展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 生物膜空间上的发展 | 第15-16页 |
| 1.4 Ⅲ型分泌系统(T3SS) | 第16-19页 |
| 1.5 耐药性 | 第19-25页 |
| 1.5.1 细菌耐药的普遍性 | 第19-20页 |
| 1.5.2 细菌耐药产生的外因 | 第20页 |
| 1.5.3 铜绿假单胞菌耐药的机制 | 第20-21页 |
| 1.5.4 对细菌感染采取的策略 | 第21-24页 |
| 1.5.5 我国细菌耐药性的现状 | 第24-25页 |
| 1.6 本论文研究的内容和意义 | 第25-26页 |
| 2 铜绿假单胞菌关键致病调节因子ExsA的转录调控分子靶标筛选 | 第26-48页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 菌株 | 第26-27页 |
| 2.2.2 质粒 | 第27页 |
| 2.2.3 主要酶及试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.5 主要试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.3 试验方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.3.2 电转化实验 | 第29-30页 |
| 2.3.3 铜绿假单胞菌基因组 DNA 的提取 | 第30页 |
| 2.3.4 质粒的提取方法(生工) | 第30-31页 |
| 2.3.5 PCR产物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.6 蛋白的小量表达 | 第32页 |
| 2.3.7 蛋白的大量表达 | 第32-34页 |
| 2.3.8 SDS-PAGE | 第34页 |
| 2.3.9 Native胶的配制(6%) | 第34页 |
| 2.3.10 凝胶迁移实验 | 第34-35页 |
| 2.3.11 Chip-sep染色质免疫共沉淀的方法 | 第35页 |
| 2.3.12 DNA片段构建测序文库 | 第35-36页 |
| 2.3.13 文库序列的测定 | 第36页 |
| 2.3.14 EMSA反应 | 第36-37页 |
| 2.3.15 PCR反应 | 第37页 |
| 2.3.16 样品浓度的计算 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-46页 |
| 2.4.1 ExsA的ChIP-seq结果 | 第38-40页 |
| 2.4.2 MEME分析序列的mitif | 第40-43页 |
| 2.4.3 ChIP-seq结果的分类 | 第43页 |
| 2.4.4 凝胶迁移实验(EMSA)检测ExsA与基因片段的结合力 | 第43-44页 |
| 2.4.5 ExsA与VqsM之间可能存在互作系统 | 第44-45页 |
| 2.4.6 wzZ启动子区域具有多个高度保守序列 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-47页 |
| 2.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 3 ExsA对靶标的调控 | 第48-72页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.2.1 菌株 | 第49页 |
| 3.2.2 表达载体 | 第49页 |
| 3.2.3 主要酶及试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.4 实验中所用溶液的配制 | 第50页 |
| 3.3 试验方法 | 第50-57页 |
| 3.3.1 细菌的培养 | 第50页 |
| 3.3.2 过表达载体的构建 | 第50-55页 |
| 3.3.3 发光载体构建 | 第55-56页 |
| 3.3.4 细菌实验 | 第56-57页 |
| 3.4 结果 | 第57-69页 |
| 3.4.1 启动子载体的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.2 过表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.4.3 启动子-lux的表达 | 第59-64页 |
| 3.4.4 ExsA对靶基因的调节 | 第64-66页 |
| 3.4.5 ExsA对铜绿假单胞菌其它代谢系统的调节 | 第66-68页 |
| 3.4.6 细菌活性实验 | 第68-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-71页 |
| 3.6 本章小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 在学期间的研究成果 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
