| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 图表清单 | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1 奶牛乳腺乳蛋白合成的调控 | 第15-17页 |
| 1.1 乳蛋白合成的调控因素 | 第15-16页 |
| 1.2 乳蛋白合成的功能基因 | 第16页 |
| 1.3 乳蛋白合成的信号通路 | 第16-17页 |
| 2 氨基酸对乳蛋白合成的调控及其调控通路 | 第17-20页 |
| 2.1 mTORC1信号通路 | 第18-20页 |
| 3 Sestrin2对mTOR信号通路的调控 | 第20-21页 |
| 3.1 SESN2通过AMPK调控mTORC1 | 第20页 |
| 3.2 SESN2-Rags复合物-GATOR-mTORC1 | 第20-21页 |
| 3.3 SESN2的氨基酸感受器作用 | 第21页 |
| 4 研究目的、意义与内容 | 第21-23页 |
| 4.1 研究目的 | 第21页 |
| 4.2 研究意义 | 第21-22页 |
| 4.3 研究内容 | 第22页 |
| 4.4 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 Sestrin2负向调控奶牛乳腺上皮细胞中氨基酸诱导的酪蛋白合成 | 第23-46页 |
| 1. 前言 | 第23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及氨基酸处理 | 第23-24页 |
| 2.2 基因过表达 | 第24-26页 |
| 2.3 基因干扰 | 第26-27页 |
| 2.4 细胞增殖检测 | 第27页 |
| 2.5 细胞周期检测 | 第27页 |
| 2.6 蛋白表达检测 | 第27-28页 |
| 2.7 蛋白亚细胞共定位检测 | 第28页 |
| 2.8 数据分析与处理 | 第28-29页 |
| 3. 结果 | 第29-43页 |
| 3.1 氨基酸调控细胞增殖与乳蛋白合成过程中抑制SESN2的表达 | 第29-31页 |
| 3.2 SESN2负向调控氨基酸诱导的细胞增殖 | 第31-34页 |
| 3.3 SESN2负向调控氨基酸诱导的酪蛋白合成 | 第34-36页 |
| 3.4 SESN2负向调控氨基酸诱导的mTORC1通路的活化 | 第36-42页 |
| 3.5 SESN2通过mTORC1通路负向调控细胞增殖与乳蛋白合成 | 第42-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-44页 |
| 4.1 氨基酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖及酪蛋白合成的调控 | 第43-44页 |
| 4.2 氨基酸对乳腺细胞中mTORC1上游通路的调控 | 第44页 |
| 4.3 SESN2对乳腺细胞中mTORC1通路、细胞增殖和酪蛋白合成的调控 | 第44页 |
| 5. 小结 | 第44-46页 |
| 第三章 Sestrin2通过SH3BP4负向调控氨基酸诱导的酪蛋白合成 | 第46-65页 |
| 1. 前言 | 第46页 |
| 2. 材料与方法 | 第46-51页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及氨基酸处理 | 第46-47页 |
| 2.2 蛋白质免疫共沉淀 | 第47-48页 |
| 2.3 蛋白质质谱 | 第48-50页 |
| 2.4 基因过表达与干扰 | 第50页 |
| 2.5 细胞增殖检测 | 第50-51页 |
| 2.6 蛋白表达检测 | 第51页 |
| 2.7 蛋白亚细胞共定位检测 | 第51页 |
| 2.8 数据分析与处理 | 第51页 |
| 3. 结果 | 第51-63页 |
| 3.1 SESN2结合蛋白的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2 SESN2与SH3BP4结合 | 第52-54页 |
| 3.3 SESN2通过SH3BP4负向调控细胞增殖与酪蛋白合成 | 第54-55页 |
| 3.4 SESN2通过SH3BP4负向调控mTORC1通路 | 第55-58页 |
| 3.5 SESN2调控氨基酸诱导的SH3BP4与Rag GTPase的结合 | 第58-61页 |
| 3.6 氨基酸通过ATF4调控SESN2的表达 | 第61-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-64页 |
| 4.1 SESN2抑制氨基酸诱导的mTORC1通路的调控途径 | 第63页 |
| 4.2 氨基酸对SESN2表达的调控 | 第63-64页 |
| 5. 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 Sestrin2通过GNG12负向调控氨基酸诱导的酪蛋白合成 | 第65-86页 |
| 1. 前言 | 第65页 |
| 2. 材料与方法 | 第65-69页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及氨基酸处理 | 第65-66页 |
| 2.2 溶酶体膜蛋白提取 | 第66-67页 |
| 2.3 SWATH鉴定溶酶体膜蛋白 | 第67-68页 |
| 2.4 SWATH结果分析 | 第68页 |
| 2.5 SWATH结果验证及蛋白筛选 | 第68页 |
| 2.6 蛋白质免疫共沉淀 | 第68页 |
| 2.7 基因过表达与干扰 | 第68-69页 |
| 2.8 细胞增殖检测 | 第69页 |
| 2.9 蛋白表达检测 | 第69页 |
| 2.10 数据分析与处理 | 第69页 |
| 3. 结果 | 第69-83页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞溶酶体膜蛋白的提取及纯度验证 | 第69-70页 |
| 3.2 SWATH鉴定奶牛乳腺上皮细胞溶酶体膜蛋白 | 第70页 |
| 3.3 SWATH结果验证及蛋白筛选 | 第70-72页 |
| 3.4 氨基酸促进GNG12表达及溶酶体定位 | 第72-73页 |
| 3.5 GNG12正向调控氨基酸诱导的细胞增殖 | 第73页 |
| 3.6 GNG12正向调控氨基酸诱导的酪蛋白合成 | 第73-75页 |
| 3.7 GNG12正向调控氨基酸诱导的mTORC1通路 | 第75-77页 |
| 3.8 GNG12通过mTORC1通路调控细胞增殖与酪蛋白合成 | 第77-78页 |
| 3.9 GNG12通过Ragulator调控mTORC1通路 | 第78-81页 |
| 3.10 SESN2抑制氨基酸诱导的GNG12的表达及定位 | 第81-83页 |
| 4. 讨论 | 第83-85页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞溶酶体膜蛋白组的鉴定 | 第83-84页 |
| 4.2 溶酶体膜蛋白对乳蛋白合成的调控 | 第84页 |
| 4.3 GNG12对氨基酸诱导的乳蛋白合成的调控及通路 | 第84-85页 |
| 5. 小结 | 第85-86页 |
| 第五章 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 附录 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 个人简介 | 第102页 |
