摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7页 |
ABBREVIATION | 第8-10页 |
1 INTRODUCTION | 第10-30页 |
1.1 Literature review | 第13-29页 |
1.1.1 Rice as a Model Plant | 第13-14页 |
1.1.2 Lignin and Lignocellulosic Biomass Conversion | 第14-15页 |
1.1.3 The Lignin Monolignol Biosynthetic Pathway | 第15-17页 |
1.1.4 The Recent Developments in Transgenic Technologies and CRISPR/Cas9 Gene-Editing System | 第17-29页 |
1.2 Research Objectives | 第29-30页 |
2 MATERIAL AND METHOD | 第30-51页 |
2.1 Selection of Genes | 第30页 |
2.2 Designing sgRNA | 第30-32页 |
2.3 Vector Construction | 第32-34页 |
2.3.1 Primer Renaturation | 第32-33页 |
2.3.2 CRISPR Vector Restriction Digestion | 第33页 |
2.3.3 DNA and Vector Ligation | 第33-34页 |
2.4 Transform Escherichia coli DH5α Competent Cells | 第34-37页 |
2.4.1 Preparation of DH5α Competent Cells | 第34-36页 |
2.4.2 Transforming DH5α Competent Cells | 第36页 |
2.4.3 LB-Medium | 第36-37页 |
2.5 Selection of Positive Colonies | 第37-39页 |
2.5.1 PCR Protocol | 第37-39页 |
2.5.2 Sanger Sequencing | 第39页 |
2.6 Sub-Clone Vector into Agrobacterium | 第39-40页 |
2.6.1 Freeze–Thaw Method | 第40页 |
2.7 Rice Transformation | 第40-47页 |
2.7.1 Induction of Calli | 第41页 |
2.7.2 Preparation of Calli and Agrobacterium | 第41页 |
2.7.3 Infection of Callus with Agrobacterium | 第41-47页 |
2.8 Detection of Positive Plants | 第47-50页 |
2.8.1 DNA Extraction | 第47-49页 |
2.8.2 CTAB Extraction Buffer | 第49-50页 |
2.9 Software and Websites Used | 第50-51页 |
3 RESULTS AND ANALYSIS | 第51-84页 |
3.1 Collection of Protein Sequences and Alignment | 第51页 |
3.2 Identities of Genes with their Homologous Proteins | 第51-54页 |
3.3 Multiple Sequence Alignment and Phylogenetic Tree | 第54-59页 |
3.4 3D Proteins Structures Prediction | 第59-62页 |
3.5 Identification of Unique Sites in Proteins to Design sgRNA | 第62-63页 |
3.6 Designed sgRNA | 第63页 |
3.7 Vector Construction | 第63-67页 |
3.8 Identification of Positive E. coli Colonies and Sequencing Results | 第67-69页 |
3.9 Sub-Cloning of Plasmid into Agrobacterium tumefaciens | 第69-71页 |
3.10 T0 Generation Mutants | 第71-73页 |
3.11 Mutations Observed in T0 Generation | 第73-75页 |
3.12 Phenotypes Observed in Mutant Plants | 第75-78页 |
3.13 Mutants Protein Sequence Predictions and Alignment | 第78-84页 |
4 DISCUSSION | 第84-87页 |
4.1 Some Remaining Issues | 第86-87页 |
REFERENCES | 第87-104页 |
Acknowledgements | 第104-105页 |