| 摘要 | 第7-9页 |
| abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 转基因作物发展和应用研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 抗除草剂转基因作物发展历程 | 第14-16页 |
| 1.2.1 抗除草剂转基因作物发展 | 第14-15页 |
| 1.2.2 抗广谱性除草剂 | 第15-16页 |
| 1.3 草甘膦及抗草甘膦转基因研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 草甘膦 | 第16页 |
| 1.3.2 草甘膦作用机理 | 第16-17页 |
| 1.3.3 抗草甘膦作物的获得途径 | 第17-19页 |
| 1.4 草铵膦及抗草铵膦转基因研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4.1 草铵膦 | 第19-20页 |
| 1.4.2 草铵膦作用机理 | 第20页 |
| 1.4.3 抗草铵膦作物的获得 | 第20-21页 |
| 1.5 抗广谱性除草剂转基因油菜开发 | 第21-22页 |
| 1.6 抗广谱性除草剂基因和作物获得的新途径 | 第22页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第22-24页 |
| 2.材料和方法 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第24页 |
| 2.2 主要试剂和耗材 | 第24-26页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基和相关试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.3.1载体构建及电击法转化农杆菌GV3101 | 第26-27页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.3.3 转基因植株的阳性检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4 转基因阳性植株喷药处理 | 第29页 |
| 2.3.5 Southernblot | 第29-30页 |
| 2.3.6 Westernblot | 第30-31页 |
| 2.3.7 插入位点鉴定 | 第31-34页 |
| 2.3.8 半定量RT-PCR反应 | 第34-35页 |
| 2.3.9 实验结果整理及数据分析 | 第35-36页 |
| 3.结果与分析 | 第36-52页 |
| 3.1 转化载体构建 | 第36-37页 |
| 3.1.1 I.variabilis-EPSPS*基因转化载体构建 | 第36页 |
| 3.1.2 RePAT*基因转化载体构建 | 第36-37页 |
| 3.2 I.variabilis-EPSPS*转基因油菜植株的培育与鉴定 | 第37-49页 |
| 3.2.1 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株的培育 | 第37-38页 |
| 3.2.2 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株阳性鉴定 | 第38页 |
| 3.2.3 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株T0代抗性初步鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.4 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株转基因拷贝数分析 | 第39-40页 |
| 3.2.5 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因阳性植株表达分析 | 第40-41页 |
| 3.2.6 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株表达蛋白分析 | 第41-43页 |
| 3.2.7 油菜转I.variabilis-EPSPS*基因植株后代抗性表型鉴定比较 | 第43-47页 |
| 3.2.7.1 T1代植株抗性鉴定结果 | 第43-45页 |
| 3.2.7.2 I.variabilis-EPSPS*转基因植株与CP4-epsps转基因植株抗性比较 | 第45-47页 |
| 3.2.8 单拷贝转基因植株中的T-DNA插入侧翼序列鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.8.1 单拷贝转基因植株插入侧翼序列分离及位置鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.8.2 I.variabilis-EPSPS*转基因插入位点验证分析 | 第48-49页 |
| 3.3 油菜转RePAT*基因植株的培育与鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3.1 油菜转RePAT*基因植株的培育 | 第49-50页 |
| 3.3.2 油菜转RePAT*基因植株阳性鉴定 | 第50页 |
| 3.3.3 油菜转RePAT*基因植株抗性鉴定 | 第50-52页 |
| 4.讨论 | 第52-57页 |
| 4.1 抗除草剂相关基因在油菜实际应用的若干思考 | 第52页 |
| 4.2 不同转I.variabilis-EPSPS*家系抗草甘膦除草剂表型差异的可能原因. | 第52-53页 |
| 4.3 I.variabilis-EPSPS*作为转化标记可能性 | 第53页 |
| 4.4 外源基因整合类型和位点存在一定的偏好性 | 第53-54页 |
| 4.5 关于RePAT*基因转化效率低的可能原因 | 第54-55页 |
| 4.6 抗广谱性除草剂在油菜应用和种质资源中的展望 | 第55页 |
| 4.7 下一步工作设想 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
