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电化学方法分析14-3-3c和g基因在转基因烟草中的表达与功能

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
缩略词第17-18页
第一章 绪论第18-35页
    1.1 环境中HCHO污染现状第18-19页
    1.2 环境中HCHO对人体的危害第19页
    1.3 环境中HCHO治理的现状第19-21页
    1.4 高等植物吸收HCHO的研究进展第21-23页
        1.4.1 野生型植物吸收HCHO的研究进展第21-22页
        1.4.2 基因工程改造植物吸收HCHO的研究进展第22-23页
    1.5 高等植物代谢HCHO的研究进展第23-25页
        1.5.1 高等植物代谢气体HCHO的研究进展第23页
        1.5.2 高等植物代谢液体HCHO的研究进展第23-25页
    1.6 14-3-3蛋白的研究进展第25-29页
        1.6.1 14-3-3蛋白的结构与功能第25-26页
        1.6.2 14-3-3蛋白调控靶蛋白的作用机制第26页
        1.6.3 14-3-3蛋白对植物抗氧化酶的调控作用第26-27页
        1.6.4 14-3-3蛋白对植物碳、氮代谢的调控作用第27-29页
    1.7 电化学分析方法的应用进展第29-33页
        1.7.1 丝网印刷技术和电极概述第29-30页
        1.7.2 电化学DNA传感器的研究进展第30-32页
        1.7.3 电化学免疫传感器的研究进展第32-33页
    1.8 本研究的目的和意义第33-35页
第二章 电化学方法分析14-3-3c和g基因转录水平第35-49页
    2.1 材料与方法第36-40页
        2.1.1 植物材料第36页
        2.1.2 烟草的培养第36-37页
        2.1.3 烟草叶片总RNA提取及cDNA合成第37-38页
        2.1.4 荧光定量PCR第38-39页
        2.1.5 电极的制备第39页
        2.1.6 DNA探针的固定第39-40页
        2.1.7 DNA杂交第40页
        2.1.8 指示剂的嵌入及电化学检测第40页
    2.2 结果与分析第40-47页
        2.2.1 荧光定量PCR分析14-3-3c和g基因在烟草中的转录水平第40-42页
        2.2.2 不同修饰电极的电化学表征第42页
        2.2.3 亚甲基蓝在不同修饰的电极上的差分脉冲伏安曲线第42-43页
        2.2.4 电化学DNA传感器的选择性第43-44页
        2.2.5 标准曲线的制作第44-45页
        2.2.6 烟草RNA样品的电化学检测第45-46页
        2.2.7 烟草cDNA样品的电化学检测第46-47页
    2.3 讨论第47-49页
第三章 电化学方法分析14-3-3c和g蛋白表达水平第49-64页
    3.1 材料与方法第50-56页
        3.1.1 植物材料第50页
        3.1.2 烟草的培养第50页
        3.1.3 烟草叶片总蛋白的提取第50页
        3.1.4 蛋白浓度的测定第50页
        3.1.5 14-3-3蛋白的诱导表达第50-51页
        3.1.6 14-3-3蛋白的纯化第51页
        3.1.7 WesternBlot分析第51-54页
        3.1.8 抗体的生物素标记第54页
        3.1.9 丝网印刷碳电极的电化学活化第54页
        3.1.10 抗体的组装第54页
        3.1.11 样品的检测第54-55页
        3.1.12 电化学测量第55-56页
    3.2 结果与分析第56-62页
        3.2.1 14-3-3蛋白的表达和纯化第56页
        3.2.2 WesternBlot分析14-3-3c和g蛋白表达水平第56-57页
        3.2.3 TMB在印刷电极上的活性检测第57-59页
        3.2.4 印刷电极的电化学活化检测第59-60页
        3.2.5 不同浓度的14-3-3抗原与电流之间的关系第60-61页
        3.2.6 烟草总蛋白样品的电化学检测第61-62页
    3.3 讨论第62-64页
第四章 14-3-3c和g在转基因烟草中的功能分析第64-76页
    4.1 材料与方法第64-66页
        4.1.1 植物材料第64页
        4.1.2 烟草的培养第64页
        4.1.3 14-3-3转基因烟草叶片抗氧化酶及甲醛代谢相关酶基因转录水平分析第64-65页
        4.1.4 厌氧胁迫下转基因烟草叶片代谢产物的13C-NMR测定第65页
        4.1.5 液体H13CHO胁迫下转基因烟草叶片代谢产物的13C-NMR测定第65-66页
    4.2 结果与分析第66-74页
        4.2.1 14-3-3c和g表达改变对转基因烟草叶片抗氧化酶基因转录的影响第66-68页
        4.2.2 14-3-3c和g表达改变对烟草叶片甲醛代谢相关酶基因转录的影响第68-69页
        4.2.3 14-3-3c和g表达改变对转基因烟草叶片厌氧代谢的影响第69-70页
        4.2.4 14-3-3c和g表达改变对转基因烟草叶片甲醛代谢的影响第70-74页
    4.3 讨论第74-76页
第五章 总结与展望第76-78页
致谢第78-79页
参考文献第79-86页
附录A 攻读硕士期间发表的论文和专利第86页

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