| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 菌种目录 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 多糖的研究现状与进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 植物源多糖 | 第15-16页 |
| 1.2.2 动物源多糖 | 第16页 |
| 1.2.3 微生物多糖 | 第16-17页 |
| 1.3 乳酸菌胞外多糖概述 | 第17页 |
| 1.3.1 乳酸菌胞外多糖 | 第17页 |
| 1.3.2 乳酸菌胞外多糖的分类 | 第17页 |
| 1.4 乳酸菌胞外多糖的生物学特性 | 第17-20页 |
| 1.4.1 抑制病原菌生长 | 第17-18页 |
| 1.4.2 乳酸菌EPS的抗氧化作用 | 第18-19页 |
| 1.4.3 乳酸菌EPS的粘附作用 | 第19页 |
| 1.4.4 乳酸菌EPS的免疫调节作用 | 第19页 |
| 1.4.5 乳酸菌EPS的抗肿瘤活性 | 第19-20页 |
| 1.5 植物乳杆菌及其基因组学研究进展 | 第20-23页 |
| 1.5.1 参与胞外多糖生物合成的相关基因 | 第21-22页 |
| 1.5.2 植物乳杆菌参与胞外多糖生物合成的相关基因 | 第22-23页 |
| 1.5.3 引导糖基转移酶 | 第23页 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 L.plantarumYM-4-3所产胞外多糖分离纯化以及活性验证 | 第25-45页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 培养基及试剂配制 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 L.plantarumYM-4-3细胞活化 | 第28页 |
| 2.3.2 L.plantarumYM-4-3菌株所产胞外多糖的提取与纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 L.plantarumYM-4-3菌株所产胞外多糖抗氧化活性分析 | 第29-32页 |
| 2.3.4 L.plantarumYM-4-3菌株生物合成EPS细胞内抗氧化分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 L.plantarumYM-4-3菌株所产EPS体外抗肿瘤活性分析 | 第33页 |
| 2.3.6 L.plantarumYM-4-3菌株亚硝酸盐清除能力测定 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第34-41页 |
| 2.4.1 L.plantarumYM-4-3生物合成EPS分离纯化 | 第34-36页 |
| 2.4.2 L.Plantarum生物合成EPS抗氧化 | 第36-39页 |
| 2.4.3 L.PlantarumYM-4-3生物合成EPS抗肿瘤效果 | 第39-40页 |
| 2.4.4 L.plantarumYM-4-3菌株亚硝酸盐清除活性 | 第40-41页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第41-44页 |
| 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 L.plantarumYM-4-3引导糖基转移酶基因敲除及性状鉴定 | 第45-71页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第45页 |
| 3.2.2 实验质粒及引物 | 第45-46页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.4 培养基及试剂配制 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-59页 |
| 3.3.1 YM-4-3菌株引导糖基转移酶基因的克隆与测序 | 第47-49页 |
| 3.3.2 荧光定量PCR检测YM-4-3菌株引导糖基转移酶基因表达水平差异 | 第49-50页 |
| 3.3.3 温度敏感型质粒基因敲除原理 | 第50-52页 |
| 3.3.4 敲除载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.5 YM-4-3单敲菌株的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.6 YM-4-3敲除菌株验证 | 第56-58页 |
| 3.3.7 YM-4-3双敲菌株的构建 | 第58-59页 |
| 3.3.8 敲除菌株多糖含量测定 | 第59页 |
| 3.4 实验结果 | 第59-68页 |
| 3.4.1 寻找YM-4-3基因组中引导糖基转移酶cps 2E和cps 4E序列 | 第59页 |
| 3.4.2 cps 4E和cps 2E的克隆与测序 | 第59-60页 |
| 3.4.3 cps4E基因qPCR结果 | 第60-62页 |
| 3.4.4 引导糖基转移酶敲除菌株 | 第62-65页 |
| 3.4.5 SouthernBlot实验结果 | 第65-66页 |
| 3.4.6 敲除菌株RNA水平验证 | 第66-67页 |
| 3.4.7 双敲除菌株 | 第67页 |
| 3.4.8 敲除菌株多糖含量 | 第67-68页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第68-70页 |
| 本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 植物乳杆菌YM-4-3野生菌株与敲除菌株转录组学分析 | 第71-90页 |
| 4.1 引言 | 第71页 |
| 4.2 材料与方法 | 第71-75页 |
| 4.2.1 实验样品处理 | 第71-72页 |
| 4.2.2 转录组文库的构建及测序 | 第72页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第72-74页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR(RT-PCR)验证转录组数据 | 第74-75页 |
| 4.3 实验结果 | 第75-88页 |
| 4.3.1 Reads统计分析 | 第75页 |
| 4.3.2 PCA主成分分析 | 第75-76页 |
| 4.3.3 测序评估 | 第76-77页 |
| 4.3.4 基因差异表达分析 | 第77-78页 |
| 4.3.5 GO显著性富集分析 | 第78-80页 |
| 4.3.6 Pathway显著性分析 | 第80-87页 |
| 4.3.7 RT-qPCR验证转录组结果 | 第87-88页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第88-89页 |
| 4.5 小结 | 第89-90页 |
| 总结与展望 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 附录1 | 第98-99页 |
| 附录2 | 第99-102页 |
| 附录3 | 第102-104页 |
