| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1 表观遗传学基本内容 | 第13页 |
| 2 组蛋白修饰 | 第13-15页 |
| 2.1 组蛋白甲基化动态修饰 | 第13-15页 |
| 3 蛋白精氨酸甲基转移1(PRMT1) | 第15-18页 |
| 3.1 PRMT1结构 | 第15-16页 |
| 3.2 PRMT1的功能与相关疾病 | 第16-17页 |
| 3.3 靶向PRMT1的小分子抑制剂 | 第17-18页 |
| 4 蛋白精氨酸甲基转移5(PRMT5) | 第18-22页 |
| 4.1 PRMT5的结构 | 第18-19页 |
| 4.2 PRMT5的功能与相关疾病 | 第19-20页 |
| 4.3 靶向PRMT5的小分子抑制剂 | 第20-22页 |
| 第二章 靶向PRMT1小分子抑制剂的实验设计方案 | 第22-24页 |
| 1 实验目的、意义 | 第22页 |
| 2 研究内容 | 第22-23页 |
| 2.1 靶向PRMT1的小分子化合物的发现与优化 | 第22页 |
| 2.2 小分子与PRMT1的结合模式分析以及细胞水平活性评价 | 第22-23页 |
| 3 实验流程图 | 第23-24页 |
| 第三章 靶向PRMT1的小分子化合物的发现与优化 | 第24-37页 |
| 1 材料与试剂 | 第24页 |
| 1.1 试剂 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-30页 |
| 2.1 骨架跃迁 | 第24页 |
| 2.2 全合成pET28a-rPRMT1质粒 | 第24-25页 |
| 2.3 表达纯化目的蛋白 | 第25-27页 |
| 2.4 构建 TR-FRET 体系并检测化合物 | 第27-28页 |
| 2.5 放射性同位素方法定量化合物的活性 | 第28-29页 |
| 2.6 结构优化及构效分析 | 第29页 |
| 2.7 构建 PRMT1 的 PTS 平台并检测化合物 | 第29页 |
| 2.8 利用NMR实验检测化合物 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-36页 |
| 3.1 骨架跃迁得到11个候选化合物结构 | 第30页 |
| 3.2 经过Ni柱纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳 | 第30-31页 |
| 3.3 经过Superdex75柱纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳 | 第31-32页 |
| 3.4 TR-FRET初筛结果 | 第32-33页 |
| 3.5 放射性同位素的方法检测Pentamidine化合物的活性 | 第33-34页 |
| 3.6 二脒类衍生物结构与活性 | 第34页 |
| 3.7 PTS实验验证Hexamidine与PRMT1蛋白的结合 | 第34-35页 |
| 3.8 NMR实验验证Hexamidine与PRMT1蛋白的结合 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 小分子与PRMT1结合模式分析以及细胞水平活性评价 | 第37-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-38页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.2 试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-44页 |
| 2.1 同源模建 | 第38-42页 |
| 2.2 分子对接 | 第42页 |
| 2.3 核磁竞争实验 | 第42页 |
| 2.4 选择性实验 | 第42页 |
| 2.5 细胞增殖实验 | 第42-43页 |
| 2.6 WesternBlot | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| 3.1 同源模建 | 第44页 |
| 3.2 结合模式分析 | 第44-45页 |
| 3.3 Hexamidine对PRMT3-5的体外酶活抑制结果 | 第45-47页 |
| 3.4 细胞水平分析 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 靶向PRMT5小分子抑制剂的实验设计方案 | 第50-52页 |
| 1 实验目的、意义 | 第50页 |
| 2 研究内容 | 第50-51页 |
| 2.1 靶向PRMT5的小分子化合物的发现与优化 | 第50页 |
| 2.2 DC_Y134化合物的细胞水平活性评价 | 第50-51页 |
| 3 实验流程图 | 第51-52页 |
| 第六章 靶向PRMT5的小分子化合物的发现与优化 | 第52-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第52页 |
| 1.1 试剂 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 分子对接 | 第52页 |
| 2.2 放射性同位素实验 | 第52页 |
| 2.3 相似性搜索 | 第52-53页 |
| 2.4 选择性实验 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-55页 |
| 3.1 初筛及优化结果 | 第53-55页 |
| 3.2 选择性结果 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第七章 DC_Y134化合物的细胞水平活性评价 | 第57-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第57页 |
| 1.1 材料 | 第57页 |
| 1.2 试剂 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| 2.1 细胞增殖实验 | 第57-58页 |
| 2.2 WesternBlot | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-61页 |
| 3.1 细胞增殖结果 | 第58-59页 |
| 3.2 WesternBlot结果 | 第59-60页 |
| 3.3 周期和凋亡结果 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
