| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第8-13页 |
| 第一部分 基于固态纳米孔的蛋白质 BSA 单分子检测 | 第13-47页 |
| 第一章 综述 | 第13-23页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 纳米孔检测技术的基本原理 | 第14页 |
| 1.3 纳米孔的种类 | 第14-17页 |
| 1.3.1 生物纳米孔 | 第15页 |
| 1.3.2 固态纳米孔 | 第15-17页 |
| 1.3.3 混合纳米孔 | 第17页 |
| 1.4 固态纳米孔的制备 | 第17-19页 |
| 1.4.1 FIB 制备 | 第18-19页 |
| 1.4.2 固态纳米孔的表征及磨破的分析 | 第19页 |
| 1.5 纳米孔在分子检测和诊断学中的应用 | 第19-21页 |
| 1.5.1 基于纳米孔的DNA及病毒颗粒的检测 | 第19-20页 |
| 1.5.2 基于纳米孔的蛋白质的检测 | 第20-21页 |
| 1.6 纳米孔对蛋白质检测的研究意义及前景 | 第21-22页 |
| 1.7 本实验研究的内容和技术路线 | 第22-23页 |
| 1.7.1 研究目标 | 第22页 |
| 1.7.2 研究内 | 第22页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 固态纳米孔检测蛋白质 BSA | 第23-36页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.3 实验仪器及设备 | 第24页 |
| 2.4 实验步骤 | 第24-27页 |
| 2.5 蛋白质检测的结果及分析 | 第27-32页 |
| 2.5.1 蛋白质 BSA 粒径的检测及其结构图 | 第27页 |
| 2.5.2 易位事件的定义 | 第27-28页 |
| 2.5.3 易位信号的统计分析 | 第28-30页 |
| 2.5.4 蛋白质 BSA 与尿素（Urea）相互作用的荧光光谱的分析 | 第30-31页 |
| 2.5.5 经尿素变性后蛋白质 BSA 的固态纳米孔检测结果的分析 | 第31-32页 |
| 2.6 讨论 | 第32-34页 |
| 2.6.1 芯片完整性对固态纳米孔检测试验的影响 | 第32-33页 |
| 2.6.2 蛋白质 BSA 分子在纳米孔中易位的运动状态的分析 | 第33-34页 |
| 2.7 本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 固态纳米孔检测金纳米棒 | 第36-47页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第36页 |
| 3.3 实验步骤 | 第36页 |
| 3.4 金纳米棒易位结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.4.1 固态纳米孔芯片及金纳米棒的表征 | 第36-37页 |
| 3.4.2 金纳米棒易位事件的分类 | 第37-39页 |
| 3.4.3 金纳米棒在不同电压下易位事件的统计分析 | 第39-41页 |
| 3.5 纳米孔周围及孔内电场的模拟 | 第41-43页 |
| 3.5.1 Comsol 模拟软件的建模方法 | 第41-42页 |
| 3.5.2 同一孔径不同电压下的电场模拟 | 第42-43页 |
| 3.6 讨论 | 第43-45页 |
| 3.6.1 固态纳米孔孔径大小的选择 | 第43-44页 |
| 3.6.2 KCl 电解液浓度对检测物质的影响 | 第44页 |
| 3.6.3 外加电压的选择对纳米孔检测实验的影响 | 第44-45页 |
| 3.7 本章小结 | 第45-47页 |
| 第二部分 红曲菌中桔霉素和 Monacolin K 合成基因的研究 | 第47-84页 |
| 第四章 综述 | 第47-53页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 桔霉素及其合成相关基因 | 第47-50页 |
| 4.3 Monacolin K 及其合成相关基因 | 第50页 |
| 4.4 红曲菌基因敲除 | 第50-51页 |
| 4.4.1 基因敲除 | 第50页 |
| 4.4.2 基因敲除菌株的筛选及验证 | 第50-51页 |
| 4.4.3 基因敲除方法在真菌菌种中的应用 | 第51页 |
| 4.5 本部分的研究内容、目的及意义 | 第51-53页 |
| 4.5.1 本实验研究的主要内容 | 第51-52页 |
| 4.5.2 本实验研究目的与意义 | 第52-53页 |
| 第五章 红曲菌种中产桔霉素和 Monacolin K 菌株的验证 | 第53-81页 |
| 5.1 引言 | 第53页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第53-55页 |
| 5.2.1 菌种和质粒 | 第53页 |
| 5.2.2 酶和试剂 | 第53页 |
| 5.2.3 缓冲溶液 | 第53-54页 |
| 5.2.4 培养基 | 第54-55页 |
| 5.2.5 实验设备 | 第55页 |
| 5.3 实验步骤 | 第55-63页 |
| 5.3.1 菌种的培养 | 第55-56页 |
| 5.3.2 基因组 DNA 的提取 | 第56页 |
| 5.3.3 引物序列 | 第56-58页 |
| 5.3.4 PCR 扩增 | 第58-60页 |
| 5.3.5 探针的标记 | 第60页 |
| 5.3.6 红曲菌打点杂交 | 第60-61页 |
| 5.3.7 As3.4383 和 ctnF 缺失菌株次级代谢产物桔霉素及红曲色素含量的测定 | 第61-63页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第63-78页 |
| 5.4.1 红曲菌种基因组 DNA 的提取 | 第63页 |
| 5.4.2 桔霉素合成相关基因在红曲菌中的分布 | 第63-65页 |
| 5.4.3 Monacolin K 合成相关基因在红曲菌中的分布 | 第65-68页 |
| 5.4.4 通过扩增核糖体大亚基 LSU 的 D1/D2 区域片段对红曲菌分子分型的研究 | 第68-69页 |
| 5.4.5 桔霉素合成相关基因 ctnF 缺失菌株的验证 | 第69-73页 |
| 5.4.6 ctnF 缺失菌株代谢产物桔霉素含量的测定 | 第73-78页 |
| 5.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 5.6 讨论 | 第79-81页 |
| 5.6.1 34 株红曲菌及转化子基因组 DNA 的提取 | 第79页 |
| 5.6.2 长片段聚合酶链式反应 | 第79-80页 |
| 5.6.3 ctnF 基因功能分析 | 第80-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-84页 |
| 6.1 第一部分 | 第81-82页 |
| 6.1.1 工作总结 | 第81-82页 |
| 6.1.2 前景展望 | 第82页 |
| 6.2 第二部分 | 第82-84页 |
| 6.2.1 工作总结 | 第82-83页 |
| 6.2.2 下一步工作计划 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简介 | 第91页 |
