| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 L-色氨酸的性质概述 | 第11页 |
| 1.2 色氨酸的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.1 色氨酸在食品行业的应用 | 第11页 |
| 1.2.2 色氨酸在医药行业的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 色氨酸在饲料行业的应用 | 第12页 |
| 1.3 L-色氨酸的生产方法概述 | 第12-13页 |
| 1.4 L-色氨酸的合成代谢途径 | 第13-15页 |
| 1.5 大肠杆菌中 L-色氨酸的合成途径的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.5.1 产物的反馈抑制 | 第15页 |
| 1.5.2 色氨酸操纵子的阻遏及衰减作用 | 第15页 |
| 1.5.3 色氨酸的转运调控 | 第15-16页 |
| 1.5.4 其他机制 | 第16页 |
| 1.6 L-色氨酸的高产菌株育种策略 | 第16-18页 |
| 1.6.1 限速酶的反馈抑制解除 | 第16-17页 |
| 1.6.2 L-色氨酸的竞争途径的改造 | 第17页 |
| 1.6.3 解除色氨酸操纵子阻遏和衰减作用及色氨酸降解途径 | 第17页 |
| 1.6.4 转运途径改造 | 第17页 |
| 1.6.5 提高前体物质及色氨酸操纵子表达 | 第17-18页 |
| 1.7 基因改造方法及其理论 | 第18-22页 |
| 1.7.1 基因敲除技术 | 第18-20页 |
| 1.7.2 基因组定点突变技术 | 第20-22页 |
| 1.8 论文研究的主要内容 | 第22-24页 |
| 1.8.1 课题研究意义 | 第22页 |
| 1.8.2 课题研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 Escherichia coli try 全基因组测序 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 试剂 | 第24页 |
| 2.2.2 Escherichia coli try 菌株基因组提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 基因组文库构建、测序与基因组组装 | 第25页 |
| 2.2.4 基因预测与注释 | 第25-26页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的比较基因组学 | 第26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 2.3.1 Escherichia coli try 基因组的组装 | 第26页 |
| 2.3.2 Escherichia coli try 基因组的基本特征 | 第26-28页 |
| 2.3.3 Escherichia coli try 的比较基因组学 | 第28-29页 |
| 2.3.4 色氨酸合成途径相关基因分析 | 第29-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 AroG、AroF、TrpE 抗反馈抑制菌株的构建 | 第34-73页 |
| 3.1 前言 | 第34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验材料与方法 | 第35-38页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第38-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-56页 |
| 3.3.1 pSIMPLE18 –cat-sacB 质粒构建（cat 为氯霉素） | 第40-45页 |
| 3.3.2 AroG 基因点突变 | 第45-55页 |
| 3.3.3 AroF 基因点突变 | 第55页 |
| 3.3.4 TrpE 基因点突变 | 第55页 |
| 3.3.5 解除反馈抑制菌株摇瓶发酵 | 第55页 |
| 3.3.6 HPLC 检测发酵液中 L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸含量 | 第55-56页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第56-72页 |
| 3.4.1 pSIMPLE18 –cat-sacB 质粒构建 | 第56-57页 |
| 3.4.2 用于第一步同源整合的 aroG–cat-sacB 片段 | 第57-58页 |
| 3.4.3 用于第二步同源整合的 aroG（D146N）片段 | 第58-59页 |
| 3.4.4 aroG 基因被 cat-sacB 替代 | 第59-61页 |
| 3.4.5 aroG（D146N）片段回补替换基因组上的 cat-sacB | 第61-62页 |
| 3.4.6 aroF 基因被 cat-sacB 替代 | 第62-64页 |
| 3.4.7 aroF（P148L）片段回补替换基因组上的 cat-sacB | 第64-65页 |
| 3.4.8 trpE 基因被 cat-sacB 替代 | 第65-67页 |
| 3.4.9 trpE（M293T）片段回补替换基因组上的 cat-sacB | 第67-68页 |
| 3.4.10 解除反馈抑制菌株发酵检测结果 | 第68-72页 |
| 3.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第四章 色氨酸弱化机制及竞争途径的改造 | 第73-88页 |
| 4.1 前言 | 第73页 |
| 4.2 材料与方法 | 第73-74页 |
| 4.2.1 实验材料与方法 | 第73-74页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-77页 |
| 4.3.1 TrpL 基因敲除 | 第74-77页 |
| 4.3.2 TyrA 基因敲除 | 第77页 |
| 4.3.3 PheA 基因敲除 | 第77页 |
| 4.3.4 L-色氨酸标准液制备 | 第77页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第77-86页 |
| 4.4.1 Red 重组相关质粒 | 第77-78页 |
| 4.4.2 trpL 敲除 | 第78-80页 |
| 4.4.3 tyrA 基因敲除 | 第80-81页 |
| 4.4.4 pheA 基因敲除 | 第81-83页 |
| 4.4.5 改造菌株生长特征 | 第83-84页 |
| 4.4.6 L-色氨酸标准曲线绘制 | 第84页 |
| 4.4.7 敲除菌株发酵检测 L-色氨酸产量 | 第84-86页 |
| 4.5 本章小结 | 第86-88页 |
| 结论和展望 | 第88-90页 |
| 论文创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第96页 |
