| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1.前言 | 第12-24页 |
| 1.1. 对虾白斑综合症病毒研究概况 | 第12页 |
| 1.2. 对虾白斑综合症病毒的发现及命名 | 第12-15页 |
| 1.2.1. 对虾白斑综合症病毒的形态结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2. 对虾白斑综合症病毒的生活周期 | 第13-14页 |
| 1.2.3. 对虾白斑综合症病毒的分离纯化 | 第14-15页 |
| 1.3. 对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组学研究概况 | 第15-17页 |
| 1.4. 对虾白斑综合症病毒(WSSV)蛋白的功能研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1. WSSV的非结构蛋白 | 第17-18页 |
| 1.4.2. WSSV的结构蛋白 | 第18-20页 |
| 1.5. WSSV泛素化相关蛋白的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.5.1. 蛋白质降解的泛素-蛋白酶体途径 | 第20-22页 |
| 1.5.2. WSSV泛素化相关蛋白研究进展 | 第22-23页 |
| 1.6. 不依赖于连接反应克隆(LIC) | 第23-24页 |
| 2. 本论文研究的内容、目的和意义 | 第24-26页 |
| 第一部分 对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因表达库的构建 | 第26-51页 |
| 1. 前言 | 第26-27页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第27-39页 |
| 2.1. 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1. 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.2. 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.3. 细胞和培养基 | 第27页 |
| 2.1.4. 试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.5. 酶类 | 第27-28页 |
| 2.1.6. 抗生素 | 第28页 |
| 2.1.7. 引物合成及测序 | 第28页 |
| 2.1.8. 抗体 | 第28页 |
| 2.1.9. 其他试剂 | 第28-29页 |
| 2.2. 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1. 穿梭载体的设计 | 第29页 |
| 2.2.2. LIC法构建WSSV基因表达文库 | 第29-37页 |
| 2.2.3. 大肠杆菌诱导表达鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.4. 在昆虫细胞High Five表达鉴定 | 第38-39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-49页 |
| 3.1. 穿梭载体pIZ-IE1P-T7P-Flag/HA的设计 | 第39-41页 |
| 3.1.1. 启动子区的设计 | 第39页 |
| 3.1.2. 多克隆位点的设计 | 第39-41页 |
| 3.2. 穿梭载体pIZ-IE1P-T7P-Flag的构建及表达验证 | 第41-44页 |
| 3.2.1. 基因合成 | 第41-42页 |
| 3.2.2. 穿梭载体构建 | 第42页 |
| 3.2.3. 表达验证 | 第42-44页 |
| 3.3. LIC法构建WSSV基因表达文库 | 第44-46页 |
| 3.4. WSSV基因表达文库表达鉴定 | 第46-49页 |
| 3.4.1. 在E.Coli中检验表达情况 | 第46-47页 |
| 3.4.2. 在High Five细胞中检验表达情况 | 第47-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 第二部 WSV249蛋白的细胞中表达及定位 | 第51-65页 |
| 1. 前言 | 第51-52页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第52-56页 |
| 2.1. 实验材料 | 第52页 |
| 2.1.1. 质粒 | 第52页 |
| 2.1.2. 细胞和培养基 | 第52页 |
| 2.1.3. 抗体 | 第52页 |
| 2.2. 实验方法 | 第52-56页 |
| 2.2.1. 甲醇固定 | 第52页 |
| 2.2.2. 亚细胞蛋白质组抽提(ProteoExtract Subcellular Proteome ExtractionKit) | 第52-53页 |
| 2.2.3. WSV249蛋白单克隆抗体制备 | 第53-54页 |
| 2.2.4. WSV249蛋白单克隆抗体选用 | 第54-55页 |
| 2.2.5. 中心体抗体的选用 | 第55页 |
| 2.2.6. WSV249的细胞定位 | 第55-56页 |
| 3. 结果与分析 | 第56-63页 |
| 3.1. 在E.Coli和High Five中表达WSV249蛋白 | 第56-57页 |
| 3.2. 亚细胞蛋白质组的抽提确定WSV249蛋白所属细胞亚组分 | 第57页 |
| 3.3. 筛选可用的WSV249抗体 | 第57-58页 |
| 3.4. WSV249与中心体免疫荧光共定位 | 第58-63页 |
| 3.4.1. 293T细胞表达WSV249及其表达定位 | 第59-60页 |
| 3.4.2. 中心体抗体选用 | 第60-61页 |
| 3.4.3. 共定位 | 第61-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录1 主要仪器设备 | 第70-71页 |
| 附录2 常用溶液和培养基配制 | 第71-74页 |
| 附录3 WSSV基因表达库引物设计表及检验表达结果汇总表 | 第74-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
