| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 插图和附表清单 | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1. 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 绵羊肺炎支原体的概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 病原学 | 第9页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第9-10页 |
| 1.1.3 致病机理 | 第10-11页 |
| 1.1.4 临床症状和病理变化 | 第11页 |
| 1.2 绵羊肺炎支原体的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.1 免疫活性与疫苗的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.2 绵羊肺炎基因组的研究进展 | 第12页 |
| 1.3 本实验的研究目的和意义以及实验思路 | 第12-15页 |
| 1.3.1 实验目的和意义 | 第12-14页 |
| 1.3.2 实验思路 | 第14-15页 |
| 2. 绵羊肺炎支原体溶血素基因的克隆和原核表达 | 第15-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第15页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂及溶液 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-30页 |
| 2.2.1 引物的设计 | 第17页 |
| 2.2.2 基因组模板的制备 | 第17-18页 |
| 2.2.3 PCR扩增反应体系 | 第18-19页 |
| 2.2.4 Hemolysin328基因的定点突变与克隆连接 | 第19-21页 |
| 2.2.5 基因片段与PET32A质粒载体的连接 | 第21-23页 |
| 2.2.6 重组质粒转化DH5 α感受态细胞 | 第23页 |
| 2.2.7 重组质粒的PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.8 测序鉴定 | 第24页 |
| 2.2.9 重组质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.10 重组蛋白的表达 | 第25页 |
| 2.2.11 融合蛋白表达诱导条件的确定 | 第25-28页 |
| 2.2.12 重组蛋白的表达纯化 | 第28页 |
| 2.2.13 蛋白浓度的测定 | 第28-30页 |
| 2.2.14 目的蛋白的Western blot分析 | 第30页 |
| 2.2.15 重组蛋白的溶血实验 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-37页 |
| 2.3.1 Hemolysin328基因片段的PCR反应结果 | 第30-31页 |
| 2.3.2 重组质粒PCR测序结果 | 第31-32页 |
| 2.3.3 融合蛋白诱导条件 | 第32-34页 |
| 2.3.4 梯度浓度咪唑洗脱液洗脱蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 蛋白浓度测定的结果 | 第35-36页 |
| 2.3.6 western blot结果 | 第36-37页 |
| 2.3.7 溶血实验结果 | 第37页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第37-39页 |
| 2.4.1 构建能够表达重组蛋白的质粒 | 第38页 |
| 2.4.2 表达系统的选择 | 第38页 |
| 2.4.3 重组蛋白诱导条件和可溶性的分析 | 第38-39页 |
| 2.4.4 重组蛋白纯化方法的选择 | 第39页 |
| 2.4.5 选择溶血素蛋白的目的 | 第39页 |
| 3. 绵羊肺炎支原体的溶血素蛋白的免疫原性研究 | 第39-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第40页 |
| 3.1.4 主要器材 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 制备疫苗 | 第40页 |
| 3.2.2 免疫动物 | 第40-41页 |
| 3.2.3 免疫血清的制备 | 第41页 |
| 3.2.4 检测免疫小鼠血清特异性抗体 | 第41页 |
| 3.2.5 脾脏T淋巴细胞增殖实验 | 第41-42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-43页 |
| 3.3.1 血清特异性抗体水平检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2 脾脏T细胞增殖实验结果 | 第43页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第43-44页 |
| 3.4.1 特异性抗体水平的检测 | 第43页 |
| 3.4.2 脾脏T淋巴细胞增殖实验 | 第43-44页 |
| 4. 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
