| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 第一章 猪常见四种病毒和四种细菌及荧光定量PCR方法的研究概况 | 第12-22页 |
| 1.1 猪常见四种病毒的研究概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 猪瘟病毒 | 第12页 |
| 1.1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第12-13页 |
| 1.1.3 猪圆环病毒2型 | 第13页 |
| 1.1.4 猪伪狂犬病病毒 | 第13-14页 |
| 1.2 猪常见四种细菌的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.2.1 金黄色葡萄球菌 | 第14页 |
| 1.2.2 链球菌 | 第14页 |
| 1.2.3 沙门菌 | 第14-15页 |
| 1.2.4 大肠埃希菌 | 第15页 |
| 1.3 病毒检测方法的研究概况 | 第15-17页 |
| 1.3.1 病毒的分离 | 第15-16页 |
| 1.3.2 血清学检测技术 | 第16-17页 |
| 1.3.3 分子生物学检测技术 | 第17页 |
| 1.4 细菌检测方法的研究概况 | 第17-18页 |
| 1.4.1 细菌的分离鉴定 | 第17页 |
| 1.4.2 血清学检测技术 | 第17-18页 |
| 1.4.3 分子生物学检测技术 | 第18页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR检测技术的研究概况 | 第18-21页 |
| 1.5.1 实时荧光定量PCR技术的原理 | 第18页 |
| 1.5.2 实时荧光定量PCR技术的分类 | 第18-19页 |
| 1.5.3 本试验涉及病毒和细菌的荧光定量PCR方法的研究 | 第19-21页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-45页 |
| 第二章 猪常见四种病毒TaqMan多重荧光定量PCR方法的建立及初步应用 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 毒株,细胞株和菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 临床样本 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 引物和探针的设计 | 第24页 |
| 2.2.2 病毒RNA的提取及逆转录 | 第24-25页 |
| 2.2.3 病毒DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR产物回收纯化 | 第26页 |
| 2.2.6 目的片段的克隆及标准模板制备 | 第26页 |
| 2.2.7 TaqMan荧光定量PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.8 TaqMan多重实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第27页 |
| 2.2.9 TaqMan多重实时荧光定量PCR标准曲线建立 | 第27页 |
| 2.2.10 TaqMan多重实时荧光定量PCR特异性试验 | 第27-28页 |
| 2.2.11 TaqMan多重实时荧光定量PCR灵敏性试验 | 第28页 |
| 2.2.12 TaqMan多重实时荧光定量PCR重复性试验 | 第28页 |
| 2.2.13 临床样本的检测 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-34页 |
| 2.3.1 阳性质粒鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 标准模板的制备 | 第29页 |
| 2.3.3 TaqMan多重实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第29页 |
| 2.3.4 TaqMan多重实时荧光定量PCR标准曲线建立 | 第29-30页 |
| 2.3.5 TaqMan多重实时荧光定量PCR特异性试验 | 第30-31页 |
| 2.3.6 TaqMan多重实时荧光定量PCR灵敏性试验 | 第31-33页 |
| 2.3.7 TaqMan多重实时荧光定量PCR重复性试验 | 第33页 |
| 2.3.8 临床样品的检测 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 猪常见四种细菌TaqMan多重荧光定量PCR方法的建立及初步应用 | 第35-45页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌株和细胞株 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要设备仪器 | 第35页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第35-36页 |
| 3.2 方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 引物和探针的设计 | 第36页 |
| 3.2.2 细菌培养及DNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.3 目的基因的扩增 | 第37页 |
| 3.2.4 PCR产物回收纯化 | 第37页 |
| 3.2.5 目的片段的克隆及标准模板制备 | 第37页 |
| 3.2.6 TaqMan荧光定量PCR扩增 | 第37页 |
| 3.2.7 TaqMan多重实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第37页 |
| 3.2.8 TaqMan多重实时荧光定量PCR标准曲线建立 | 第37页 |
| 3.2.9 TaqMan多重实时荧光定量PCR特异性试验 | 第37页 |
| 3.2.10 TaqMan多重实时荧光定量PCR灵敏性试验 | 第37页 |
| 3.2.11 TaqMan多重实时荧光定量PCR重复性试验 | 第37页 |
| 3.2.12 细菌人工模拟病料的检测 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-43页 |
| 3.3.1 阳性质粒鉴定结果 | 第38页 |
| 3.3.2 标准模板的制备 | 第38页 |
| 3.3.3 TaqMan多重实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 TaqMan多重实时荧光定量PCR标准曲线建立 | 第39-40页 |
| 3.3.5 TaqMan多重实时荧光定量PCR特异性试验 | 第40-41页 |
| 3.3.6 TaqMan多重实时荧光定量PCR灵敏性试验 | 第41-42页 |
| 3.3.7 TaqMan多重实时荧光定量PCR重复性试验 | 第42-43页 |
| 3.3.8 细菌人工模拟病料的检测 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
