| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 弓形虫及其疫苗的研究概况 | 第13-23页 |
| 1.1 弓形虫概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 生活史 | 第13-14页 |
| 1.1.2 基因分型 | 第14-15页 |
| 1.1.3 致病机制 | 第15-18页 |
| 1.1.3.1 入侵机制 | 第15页 |
| 1.1.3.2 对宿主细胞的调节机制 | 第15-16页 |
| 1.1.3.3 棒状体蛋白的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2 弓形虫病疫苗研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 弓形虫病传统疫苗 | 第18-19页 |
| 1.2.2 弓形虫病弱毒疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2.3 传统基因操作技术在弱毒疫苗研发中的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9技术在弱毒疫苗研发中的应用 | 第21页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 试验研究 | 第23-47页 |
| 第二章 pVAX-ROP54核酸疫苗的构建及免疫保护性研究 | 第23-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-30页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1.1 试验动物 | 第23页 |
| 2.1.1.2 试验菌株、虫株和细胞 | 第23页 |
| 2.1.1.3 质粒 | 第23页 |
| 2.1.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1.5 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.1.6 主要溶液的配制 | 第24页 |
| 2.1.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.1.2.1 ROP54目的基因的扩增 | 第24-26页 |
| 2.1.2.2 pMD19T-ROP54重组质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.1.2.3 pVAX-ROP54重组质粒的构建 | 第27页 |
| 2.1.2.4 pVAX-ROP54重组质粒的体外表达鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1.2.5 质粒的大量提取及纯化 | 第28页 |
| 2.1.2.6 可溶性抗原STAg溶液的制备 | 第28页 |
| 2.1.2.7 小鼠分组及免疫 | 第28-29页 |
| 2.1.2.8 免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第29页 |
| 2.1.2.9 pVAX-ROP54核酸疫苗的免疫效果评价 | 第29-30页 |
| 2.1.2.10 统计学分析 | 第30页 |
| 2.2 结果 | 第30-35页 |
| 2.2.1 ROP54基因的RT-PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| 2.2.2 pMD19T-ROP54重组质粒的菌液PCR鉴定结果 | 第31页 |
| 2.2.3 重组质粒pVAX-ROP54酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| 2.2.4 重组质粒的体外表达鉴定结果 | 第32页 |
| 2.2.5 免疫小鼠的抗体水平检测 | 第32-33页 |
| 2.2.6 免疫小鼠的细胞因子水平检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖能力检测 | 第34页 |
| 2.2.8 小鼠免疫的保护结果 | 第34-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 ROP54基因缺失株的构建及其生物学功能研究 | 第38-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 3.1.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1.1 试验动物 | 第38页 |
| 3.1.1.2 试验菌株、虫株和细胞 | 第38页 |
| 3.1.1.3 质粒 | 第38页 |
| 3.1.1.4 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.1.5 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.1.6 主要溶液的配制 | 第39页 |
| 3.1.2 方法 | 第39-42页 |
| 3.1.2.1 敲除株质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.2.2 DHFR抗性标记基因的扩增 | 第40页 |
| 3.1.2.3 PRU株速殖子的收集 | 第40页 |
| 3.1.2.4 敲除质粒的转染 | 第40页 |
| 3.1.2.5 敲除株的药物筛选 | 第40-41页 |
| 3.1.2.6 阳性单克隆虫株的鉴定 | 第41页 |
| 3.1.2.7 阳性克隆虫株的扩繁和保存 | 第41页 |
| 3.1.2.8 噬斑试验 | 第41页 |
| 3.1.2.9 敲除株的毒力试验 | 第41-42页 |
| 3.1.2.10 敲除株的包囊形成试验 | 第42页 |
| 3.1.2.11 统计学分析 | 第42页 |
| 3.2 结果 | 第42-45页 |
| 3.2.1 pSAG1::CAS9-U6::ROP54的鉴定 | 第42页 |
| 3.2.2 DHFR抗性片段的PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 单克隆虫株的PCR鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.2.4 PRU-ΔROP54株噬斑试验结果 | 第44页 |
| 3.2.5 PRU-ΔROP54株毒力试验结果 | 第44-45页 |
| 3.2.6 PRU-ΔROP54株包囊形成试验结果 | 第45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
