| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 布鲁氏菌的研究进展 | 第13-25页 |
| 1.1 布鲁氏菌毒力因子 | 第14-17页 |
| 1.1.1 脂多糖 | 第14-15页 |
| 1.1.2 T4SS | 第15-16页 |
| 1.1.3 环状β-1,2-葡聚糖 | 第16-17页 |
| 1.1.4 其他 | 第17页 |
| 1.2 GntR家族蛋白 | 第17-19页 |
| 1.2.1 GntR转录调控因子结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 GntR家族的分类 | 第18页 |
| 1.2.3 GntR家族与细菌毒力 | 第18-19页 |
| 1.3 布鲁氏菌胞内转运机制 | 第19-21页 |
| 1.3.1 eBCVs阶段 | 第19-20页 |
| 1.3.2 rBCVs阶段 | 第20-21页 |
| 1.3.3 aBCVs阶段 | 第21页 |
| 1.4 布鲁氏菌与内质网应激 | 第21-24页 |
| 1.4.1 布鲁氏菌感染引起内质网应激 | 第21-23页 |
| 1.4.2 内质网应激和炎性反应 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究目的意义及主要内容 | 第24-25页 |
| 试验研究 | 第25-60页 |
| 第二章 GntR原核表达及多克隆抗体的制备 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 布鲁氏菌基因组提取 | 第26页 |
| 2.2.2 原核表达载体PET32a-GntR构建 | 第26-28页 |
| 2.2.3 融合蛋白的诱导表达及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 融合蛋白的纯化、透析和浓缩 | 第29-30页 |
| 2.2.5 多克隆抗体的制备 | 第30页 |
| 2.2.6 多克隆抗体效价的检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-34页 |
| 2.3.1 布鲁氏菌革兰染色鉴定 | 第31页 |
| 2.3.2 PET32a-GntR原核表达载体的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 GntR蛋白的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.3.4 GntR蛋白的纯化和鉴定 | 第33页 |
| 2.3.5 间接ELISA鉴定多克隆抗体效价 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 布鲁氏菌GntR缺失株的构建 | 第36-48页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 试验仪器 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.2 方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第37页 |
| 3.2.2 目的基因PCR扩增及胶回收 | 第37-38页 |
| 3.2.3 黏性末端目的片段的获取 | 第38-39页 |
| 3.2.4 同源重组载体PUC19G-GntR构建 | 第39-40页 |
| 3.2.5 GntR缺失株的构建 | 第40页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR检测T4SS基因的表达 | 第40-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 目的基因获得 | 第42-44页 |
| 3.3.2 同源重组载体PUC19G-GntR的鉴定 | 第44页 |
| 3.3.3 GntR缺失菌株的筛选 | 第44-45页 |
| 3.3.4 GntR调控T4SS结构蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 ΔGntR对布鲁氏菌介导的ERS和细胞因子分泌的影响 | 第48-60页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 试验仪器 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 4.2 方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 山羊肺泡巨噬细胞的分离、培养和鉴定 | 第49页 |
| 4.2.2 ΔGntR菌株在山羊肺泡巨噬细胞内的增殖变化 | 第49-50页 |
| 4.2.3 免疫荧光检测ΔGntR菌株与溶酶体的融合 | 第50页 |
| 4.2.4 荧光定量PCR检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达 | 第50-51页 |
| 4.2.5 WesternBlot检测GRP78表达 | 第51页 |
| 4.2.6 改变内质网应激状态对ΔGntR菌株胞质增殖的影响 | 第51页 |
| 4.2.7 ΔGntR菌株感染对山羊肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第51-52页 |
| 4.3 结果 | 第52-58页 |
| 4.3.1 山羊肺泡巨噬细胞的鉴定 | 第52页 |
| 4.3.2 ΔGntR菌株在山羊肺泡巨噬细胞的增殖 | 第52-53页 |
| 4.3.3 ΔGntR菌株感染山羊肺泡巨噬细胞对GRP78和CHOP表达的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.4 不同内质网应激对ΔGntR菌株增殖的影响 | 第54-57页 |
| 4.3.5 ΔGntR菌株感染对山羊肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
