| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 Gluconobacter oxydans简介 | 第10页 |
| 1.2 G.oxydans基因组的一般特征 | 第10-15页 |
| 1.2.1 G.oxydans的质粒和噬菌体 | 第12页 |
| 1.2.2 G.oxydans的呼吸链 | 第12-14页 |
| 1.2.3 G.oxydans中的氧化还原酶 | 第14-15页 |
| 1.3 G.oxydans中的PTS | 第15-16页 |
| 1.3.1 EI蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 原核生物非编码RNA | 第16-23页 |
| 1.4.1 原核生物中sRNA种类 | 第17-20页 |
| 1.4.1.1 4.5S RNA | 第17页 |
| 1.4.1.2 RNA酶P RNA | 第17-18页 |
| 1.4.1.3 OxyS RNA | 第18-19页 |
| 1.4.1.4 MicF RNA | 第19-20页 |
| 1.4.1.5 DsrA RNA | 第20页 |
| 1.4.2 sRNA的调节机制 | 第20-23页 |
| 1.4.2.1 sRNA的翻译抑制 | 第21页 |
| 1.4.2.2 sRNA诱导mRNA降解 | 第21-22页 |
| 1.4.2.3 sRNA与核糖体备用位点竞争 | 第22页 |
| 1.4.2.4 靶向开放阅读框 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题的研究目标及意义 | 第23-25页 |
| 第2章 报道基因的筛选 | 第25-40页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第25-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-39页 |
| 2.3.1 菌种活化 | 第30页 |
| 2.3.2 重组质粒pBBR-tufB的构建 | 第30-36页 |
| 2.3.2.1 含有pBBR系列质粒的抽提 | 第30-31页 |
| 2.3.2.2 片段的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.2.3 tufB启动子PCR产物的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.2.4 tufB片段和pBBR载体的双酶切 | 第33页 |
| 2.3.2.5 酶切产物的纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.2.6 tufB片段和pBBR质粒的连接反应 | 第34-35页 |
| 2.3.2.7 重组质粒pBBR-tufB转化至E.coli Trans5α | 第35页 |
| 2.3.2.8 筛选阳性重组子 | 第35-36页 |
| 2.3.3 含有gfp和rfp的重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.4 重组质粒转化至G.oxydans DSM2003感受态 | 第37-38页 |
| 2.3.5 GFP和RFP荧光量检测 | 第38-39页 |
| 2.4 本章实验小结 | 第39-40页 |
| 第3章 调控GFP表达系统的构建 | 第40-50页 |
| 3.0 前言 | 第40页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 实验所用菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 实验仪器和试剂 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-49页 |
| 3.2.1 tufB启动子分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 顺式抑制sRNA调控系统 | 第41-45页 |
| 3.2.2.1 构建顺式抑制系统 | 第41-42页 |
| 3.2.2.2 G.oxydans各菌株荧光量结果 | 第42-45页 |
| 3.2.3 顺式激活sRNA调控序列 | 第45-46页 |
| 3.2.4 反式抑制sRNA调控序列 | 第46-49页 |
| 3.3 本章实验小结 | 第49-50页 |
| 第4章 内源基因的调控 | 第50-70页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-53页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第50页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第50-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-69页 |
| 4.3.1 制备纯化EI蛋白 | 第53-59页 |
| 4.3.1.1 含EI的重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| 4.3.1.2 EI蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| 4.3.1.3 EI蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.1.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第56-58页 |
| 4.3.1.5 EI蛋白液浓度检测 | 第58-59页 |
| 4.3.2 特异性抑制G.oxydans内源性基因EI的sRNA重组质粒构建 | 第59-65页 |
| 4.3.2.1 对EI调控序列的分析 | 第59-60页 |
| 4.3.2.2 抑制EI表达的sRNA重组质粒的构建 | 第60页 |
| 4.3.2.3 抑制EI表达的sRNA重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| 4.3.2.4 三亲本结合转化法 | 第61-62页 |
| 4.3.2.5 Western Blot检测内源基因EI的表达 | 第62-65页 |
| 4.3.3 抑制EI蛋白表达的sRNA序列优化 | 第65-69页 |
| 4.3.3.1 构建含有sRNA的重组质粒 | 第66-67页 |
| 4.3.3.2 Dot Blot检测 | 第67-69页 |
| 4.4 本章实验小结 | 第69-70页 |
| 第5章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 5.1 总结 | 第70页 |
| 5.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
