| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1 毒素-抗毒素系统介绍 | 第10-17页 |
| 1.1 mazEF毒素-抗毒素系统 | 第11-16页 |
| 1.1.1 原核生物染色体上mazEF系统基因基本特征 | 第11-13页 |
| 1.1.2 mazEF介导的PCD或使细菌进入休眠状态的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 导致mazEF系统进行进入休眠期或PCD的因素 | 第14-15页 |
| 1.1.3.1 阻止噬菌体大面积感染细菌的一种保护性机制 | 第14-15页 |
| 1.1.3.2 DNA损伤引发的mazEF介导的细胞死亡 | 第15页 |
| 1.1.3.3 抑制转录与翻译的抗生素引起的mazEF介导的休眠期状态 | 第15页 |
| 1.1.3.4 氧化作用引发的mazEF介导的PCD | 第15页 |
| 1.1.3.5 高温引发的mazEF介导的细胞死亡 | 第15页 |
| 1.1.4 mazEF介导的PCD的信号转导 | 第15-16页 |
| 1.2 relBE毒素-抗毒素系统 | 第16页 |
| 1.3 ccdAB毒素-抗毒素系统 | 第16-17页 |
| 2 致病菌中的毒素-抗毒素系统 | 第17页 |
| 3 结核分枝杆菌中的MazEF毒素-抗毒素系统及研究现状 | 第17-20页 |
| 3.1 结核分枝杆菌MazEF | 第17-18页 |
| 3.2 结核分枝杆菌Rv1991a-Rv1991c | 第18页 |
| 3.3 结核分枝杆菌Rv1495 | 第18-19页 |
| 3.4 课题研究的目的意义与目标 | 第19页 |
| 3.5 课题研究主要内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-27页 |
| 1 材料 | 第20-23页 |
| 1.1 供试菌株 | 第20页 |
| 1.2 酶、试剂和试剂盒 | 第20页 |
| 1.3 供试抗生素 | 第20页 |
| 1.4 引物及寡核苷酸 | 第20-21页 |
| 1.5 供试质粒 | 第21-23页 |
| 1.6 其余缓冲液、试剂 | 第23页 |
| 1.7 培养基 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| 2.1 分子生物学基本操作 | 第23页 |
| 2.2 细菌双杂交实验 | 第23-24页 |
| 2.2.1 双杂交筛选培养基 | 第23页 |
| 2.2.2 细菌双杂交质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.3 融合蛋白的亲和纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.1 表达质粒的构建与转化 | 第24页 |
| 2.3.2 诱导表达、纯化、透析 | 第24页 |
| 2.3.3 BRADFORD测定蛋白质浓度 | 第24-25页 |
| 2.4 蛋白相互作用检测 | 第25-26页 |
| 2.4.1 蛋白PULL-DOWN | 第25页 |
| 2.4.2 WESTERN BLOTTING检测 | 第25页 |
| 2.4.3 DNA松弛螺旋测定法 | 第25-26页 |
| 2.4.4 Rv1495和Rv1102c的ssRNA内切酶活性实验 | 第26页 |
| 2.5 利用高GC含量基因的随机突变方法对Rv1495进行随机突变 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-49页 |
| 1 细菌双杂交筛库相关蛋白的相互作用 | 第27-33页 |
| 1.1 MTBMAZE,MTBMAZF与TOPA基因的克隆 | 第27-29页 |
| 1.2 MTBMAZE,MTBMAZF与TOPA点对点双杂交筛选的结果 | 第29-33页 |
| 2 MAZEF对于TOPA松弛螺旋作用研究 | 第33-37页 |
| 2.1 MAZE或MAZF对于TOPA松弛螺旋作用研究 | 第33-35页 |
| 2.2 互作的MAZEF混合物对于TOPA松弛螺旋作用研究 | 第35-37页 |
| 3 MAZF的核酸内切酶试验 | 第37-40页 |
| 3.1 Rv1495和Rv1102c蛋白的核酸内切酶试验 | 第37-38页 |
| 3.2 MAZE对于Rv1495,Rv1102c蛋白的核酸内切酶活性影响试验 | 第38-40页 |
| 4 利用随机突变技术找到Rv1495与Rv0660c互作的关键位点 | 第40-46页 |
| 4.1 Rv1495及其突变基因基因的克隆 | 第40-41页 |
| 4.2 Rv1495及突变体与Rv0660c细菌双杂交筛选结果 | 第41-42页 |
| 4.3 与Rv0660c失去互作的Rv1495突变蛋白的ssRNA内切酶实验 | 第42-44页 |
| 4.4 Rv1495突变体蛋白对TOPA松弛螺旋活性影响试验 | 第44-46页 |
| 5 利用随机突变技术找到Rv1495与TOPA互作的关键位点 | 第46-48页 |
| 5.1 细菌双杂交筛选结果 | 第46-47页 |
| 5.2 Rv1495突变蛋白对于TOPA松弛螺旋活性的影响试验 | 第47-48页 |
| 6 PULL DOWN/WESTERN BLOT实验 | 第48-49页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第49-52页 |
| 1 总结 | 第49页 |
| 2 讨论 | 第49-50页 |
| 2.1 MAZEF与TOPA的互作研究 | 第49-50页 |
| 2.2 MAZEF之间的互作研究 | 第50页 |
| 3 研究展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
