| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词(abbreviaion) | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 副猪嗜血杆菌研究现状 | 第11-14页 |
| 1.1.1 病原学 | 第11-12页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.3 副猪嗜血杆菌潜在毒力基因的筛选 | 第13-14页 |
| 1.2 巴斯德菌科转化技术研究 | 第14-19页 |
| 1.2.1 自然转化 | 第14-17页 |
| 1.2.2 电转化 | 第17-19页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第3章 材料与方法 | 第20-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第20-21页 |
| 3.1.2 酶、试剂、试剂盒及仪器 | 第21-22页 |
| 3.1.3 培养基、抗生素的配制 | 第22页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第22-23页 |
| 3.1.5 引物 | 第23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-29页 |
| 3.2.1 基因组的提取 | 第23-24页 |
| 3.2.2 质粒的提取 | 第24页 |
| 3.2.3 PCR产物和酶切产物的回收与纯化 | 第24-25页 |
| 3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25页 |
| 3.2.5 连接产物的转化 | 第25页 |
| 3.2.6 自然转化 | 第25页 |
| 3.2.7 电转化感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 3.2.8 电转化 | 第26页 |
| 3.2.9 副猪嗜血杆菌CFEs的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.10 CFEs体外甲基化质粒的方法 | 第27页 |
| 3.2.11 基因合成 | 第27页 |
| 3.2.12 质粒丢失动力学测定 | 第27-29页 |
| 第4章 结果与分析 | 第29-38页 |
| 4.1 副猪嗜血杆菌的电转化 | 第29-31页 |
| 4.1.1 Ecoli-HPS穿梭载体电转化副猪嗜血杆菌 | 第29页 |
| 4.1.2 Hha Ⅰ限制修饰系统 | 第29-30页 |
| 4.1.3 Hha Ⅰ甲基转移酶甲基化质粒后转化副猪嗜血杆菌 | 第30-31页 |
| 4.1.4 CFEs体外甲基化质粒的方法突破限制修饰系统引起的副猪嗜血杆菌电转化屏障 | 第31页 |
| 4.2 温敏型复制质粒的构建及鉴定 | 第31-35页 |
| 4.2.1 温敏型复制子的合成 | 第31-33页 |
| 4.2.2 温敏复制型质粒的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.3 温敏型复制质粒的丢失动力学特性测定 | 第34-35页 |
| 4.3 负选择标记基因的克隆和选择 | 第35-36页 |
| 4.3.1 果聚糖蔗糖基因sacB的克隆及鉴定 | 第35页 |
| 4.3.2 链霉素敏感基因rpsL的克隆及鉴定 | 第35-36页 |
| 4.4 副猪嗜血杆菌的自然转化 | 第36-38页 |
| 第5章 讨论 | 第38-43页 |
| 5.1 电转化方法可以用于副猪嗜血杆菌的转化 | 第38页 |
| 5.2 限制修饰系统影响副猪嗜血杆菌的电转化 | 第38-39页 |
| 5.3 影响副猪嗜血杆菌电转化的其它因素 | 第39页 |
| 5.4 温敏复制型质粒的构建 | 第39-40页 |
| 5.5 负选择标记的应用 | 第40-41页 |
| 5.6 联合使用温敏复制型质粒和负选择标记构建突变株 | 第41-42页 |
| 5.7 自然转化方法转化副猪嗜血杆菌的效果及影响因素 | 第42-43页 |
| 第6章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
