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基因枪介导的抗穗发芽基因转化小麦的研究

摘要第7-8页
ABSTRACT第8-9页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-22页
    1.1 穗发芽的研究进展第11-15页
        1.1.1 小麦穗发芽的危害第11页
        1.1.2 影响小麦穗发芽的主要因素第11-15页
            1.1.2.1 环境因子对穗发芽的影响第12页
            1.1.2.2 穗部形状和籽粒特性对穗发芽的影响第12-13页
            1.1.2.3 种子休眠对穗发芽的影响第13-15页
                1.1.2.3.1 植物激素对种子休眠的影响第13-14页
                1.1.2.3.2 温度对种子休眠的影响第14-15页
                1.1.2.3.3 种皮颜色对种子休眠的影响第15页
            1.1.2.4 与穗发芽相关的基因第15页
    1.2 小麦遗传转化的研究进展第15-20页
        1.2.1 基因枪介导的小麦转化第16-17页
        1.2.2 bar筛选标记基因的研究进展第17-19页
        1.2.3 PMI筛选标记基因的研究进展第19-20页
    1.3 RNAi的研究进展第20-21页
    1.4 研究目的及意义第21-22页
2 材料与方法第22-34页
    2.1 供试材料第22-26页
        2.1.1 菌株及质粒第22页
        2.1.2 基因第22页
        2.1.3 转化受体第22页
        2.1.4 酶及试剂第22-24页
            2.1.4.1 制备最小表达框的酶及试剂第22-23页
            2.1.4.2 小麦基因组DNA和种子RNA提取试剂第23页
            2.1.4.3 小麦种子内源ABA含量提取试剂第23-24页
        2.1.5 培养基第24-25页
            2.1.5.1 制备片段所需的培养基第24页
            2.1.5.2 小麦组织培养所需的培养基第24-25页
        2.1.6 引物第25-26页
    2.2 试验方法第26-34页
        2.2.1 质粒DNA的提取第26-27页
        2.2.2 DNA片段回收第27-28页
        2.2.3 幼胚的接种和培养第28页
        2.2.4 愈伤组织的高渗及基因枪轰击第28-29页
        2.2.5 恢复培养及筛选第29页
        2.2.6 壮苗、春化及移栽第29页
        2.2.7 DNA的提取第29-30页
        2.2.8 PCR扩增第30页
        2.2.9 T_2代材料种子RNA的提取第30-31页
        2.2.10 RT-PCR扩增第31页
        2.2.11 种子的萌发、春化第31页
        2.2.12 转基因植株种子内源ABA提取第31-32页
        2.2.13 转基因植株种子内源ABA水平测定第32页
        2.2.14 转基因植株的种子萌发实验第32页
        2.2.15 转基因植株的穗发芽实验第32-34页
3 结果与分析第34-49页
    3.1 最小表达框的制备第34-35页
    3.2 小麦幼胚转化及转基因植株的获得第35页
    3.3 不同生长环境对小麦遗传转化的影响第35-36页
    3.4 不同筛选剂对小麦遗传转化的影响第36-38页
    3.5 转基因小麦的PCR鉴定第38-43页
        3.5.1 2011年田间小麦转化T_0代PCR鉴定第38-39页
        3.5.2 2011年田间小麦转化T_1代PCR鉴定第39-40页
        3.5.3 2011年田间小麦转化T_2代RT-PCR鉴定第40-41页
        3.5.4 2011年温室小麦转化PCR鉴定第41-42页
        3.5.5 2012年田间小麦转化PCR鉴定第42-43页
    3.6 转基因小麦T_3代种子ABA水平测定第43-44页
    3.7 转基因小麦的种子萌发鉴定第44-45页
    3.8 转基因小麦的穗发芽鉴定第45-46页
    3.9 讨论第46-47页
    3.10 下一步工作计划第47-49页
参考文献第49-59页
致谢第59页

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