| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 制备转基因家禽的常用载体 | 第12-14页 |
| 1.1 质粒载体 | 第12-13页 |
| 1.2 病毒载体 | 第13-14页 |
| 2 转基因家禽制备方法 | 第14-16页 |
| 2.1 精子载体法 | 第14页 |
| 2.2 胚盘下腔注射法 | 第14-15页 |
| 2.3 原始生殖细胞(PGCs)介导法 | 第15页 |
| 2.4 胚胎干细胞法 | 第15页 |
| 2.5 血液注射法 | 第15-16页 |
| 3 转基因鸡的后续孵化技术 | 第16-17页 |
| 3.1 赤道开窗法 | 第16页 |
| 3.2 换壳孵化法 | 第16-17页 |
| 4 抗禽流感研究现状 | 第17-19页 |
| 4.1 抗禽流感疫苗 | 第17-18页 |
| 4.2 转基因技术的应用 | 第18-19页 |
| 5 本课题研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 抗禽流感双表达载体的构建和检测 | 第20-65页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 试验动物 | 第20页 |
| 1.2 质粒和细胞 | 第20页 |
| 1.3 试验试剂和仪器 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-47页 |
| 2.1 构建pEASY-T1-RIG-I载体 | 第22-27页 |
| 2.2 构建载体CS-RfA-EG-RIG | 第27-35页 |
| 2.3 DP表达载体的构建及检测 | 第35-42页 |
| 2.4 DP与RIG-I双表达载体的构建及检测 | 第42-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-61页 |
| 3.1 PCR结果分析 | 第47-50页 |
| 3.2 酶切鉴定结果分析 | 第50-52页 |
| 3.3 测序结果分析 | 第52-58页 |
| 3.4 shRNA表达载体的功能检测 | 第58-60页 |
| 3.5 RIG-I表达检测 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 第三章 对鸡高效转基因方法的研究 | 第65-76页 |
| 1 试剂和材料 | 第65-66页 |
| 1.1 试验动物 | 第65页 |
| 1.2 病毒 | 第65页 |
| 1.3 试验试剂和仪器 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-70页 |
| 2.1 胰酶对病毒感染鸡胚细胞效率的影响 | 第66-68页 |
| 2.2 孵化前温度处理对转基因效率的影响 | 第68-70页 |
| 3 结果分析 | 第70-74页 |
| 3.1 胰酶处理后的病毒感染能力 | 第70-71页 |
| 3.2 胰酶对鸡胚发育的影响 | 第71页 |
| 3.3 胰酶处理后慢病毒对鸡胚细胞转染效率的影响 | 第71-72页 |
| 3.4 孵化前温度处理对病毒转染鸡胚细胞效率的影响 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 结论、创新点及后续研究展望 | 第76-78页 |
| 1 结论 | 第76-77页 |
| 2 创新点 | 第77页 |
| 3 后续研究展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |