| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1 TBK1介导的抗病毒免疫调控研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1 TBK1的结构 | 第13-14页 |
| 1.2 TBK1与PRRS相互作用 | 第14-15页 |
| 1.3 TBK1在抗病毒免疫中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4 TBK1活性的负调控 | 第16-17页 |
| 2 NADPH氧化酶研究进展 | 第17-30页 |
| 2.1 呼吸爆发 | 第17-18页 |
| 2.2 活性氧的功能 | 第18-19页 |
| 2.3 活性氧的组成 | 第19页 |
| 2.4 活性氧的调节作用 | 第19-20页 |
| 2.5 NADPH氧化酶诱导活性氧产生的机制 | 第20-21页 |
| 2.6 NADPH氧化酶的组成 | 第21-30页 |
| 2.6.1 gp91phox亚基 | 第24-25页 |
| 2.6.2 p22phox亚基 | 第25页 |
| 2.6.3 p67phox亚基 | 第25页 |
| 2.6.4 p47phox亚基 | 第25-27页 |
| 2.6.5 p40phox亚基 | 第27-30页 |
| 2.6.5.1 p40phox的磷酸化、激活与组装 | 第27-28页 |
| 2.6.5.2 p40phox调控作用 | 第28-30页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第30-32页 |
| 第二章 TBK1-LIKE的功能研究 | 第32-64页 |
| 1 前言 | 第32-33页 |
| 2 材料 | 第33-35页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.2 分子生物学常用试剂 | 第34页 |
| 2.3 细胞培养用试剂及耗材 | 第34-35页 |
| 2.4 载体和菌株 | 第35页 |
| 2.5 材料鱼、细胞和病毒 | 第35页 |
| 3 方法 | 第35-48页 |
| 3.1 斑马鱼胚胎的显微注射 | 第35-36页 |
| 3.2 总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.3 CDNA的合成 | 第36-37页 |
| 3.4 荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 3.5 斑马鱼TBK1和TBK1L基因ORF的扩增及真核表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| 3.5.1 真核表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.5.2 去内毒素质粒的提取 | 第39-40页 |
| 3.5.3 序列分析 | 第40页 |
| 3.6 细胞培养 | 第40-41页 |
| 3.6.1 冻存细胞的复苏 | 第40页 |
| 3.6.2 细胞培养与传代 | 第40-41页 |
| 3.6.3 细胞的冻存 | 第41页 |
| 3.7 SVCV病毒的增殖与滴度测定 | 第41-42页 |
| 3.7.1 SVCV病毒在EPC细胞中的增殖 | 第41页 |
| 3.7.2 空斑法测定SVCV病毒滴度 | 第41-42页 |
| 3.8 细胞的转染与刺激实验 | 第42-44页 |
| 3.8.1 细胞的脂质体转染 | 第42页 |
| 3.8.2 细胞的电转染 | 第42-43页 |
| 3.8.3 G418筛选转染阳性细胞 | 第43页 |
| 3.8.4 病毒刺激实验 | 第43页 |
| 3.8.5 TBK1、TBK1L抗病毒作用分析 | 第43-44页 |
| 3.9 WESTEN BLOTTING分析 | 第44-45页 |
| 3.9.1 细胞总蛋白提取 | 第44-45页 |
| 3.9.2 Western Blotting检测目的蛋白的表达 | 第45页 |
| 3.10 TBK1L基因在斑马鱼不同发育阶段及感染SVCV的ZF4细胞中表达分析 | 第45-47页 |
| 3.10.1 不同发育阶段斑马鱼胚胎RNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.10.2 SVCV病毒感染ZF4细胞实验 | 第46页 |
| 3.10.3 Real-Time PCR检测斑马鱼胚胎TBK1L基因及病毒刺激下表达变化 | 第46-47页 |
| 3.11 荧光素酶活性实验 | 第47-48页 |
| 3.12 TBK1L对TBK1介导下IFNS和IFN刺激基因的调控 | 第48页 |
| 4 结果 | 第48-62页 |
| 4.1 TBK1L的结构分析 | 第48-50页 |
| 4.2 斑马鱼TBK1L在不同发育阶段及SVCV刺激下ZF4细胞中TBK1L的表达 | 第50-52页 |
| 4.3 斑马鱼TBK1L的过表达对宿主细胞抗SVCV感染没有影响 | 第52-55页 |
| 4.4 斑马鱼TBK1L抑制IFN启动子的激活 | 第55-56页 |
| 4.5 TBK1L抑制RLRS-MAVS介导的IFN1和IFN3启动子的活化 | 第56-57页 |
| 4.6 TBK1L抑制TBK1诱导的IFN3启动子的激活 | 第57-58页 |
| 4.7 TBK1L对IFNS和IFN相关基因的表达调控 | 第58-60页 |
| 4.8 TBK1L对TBK1介导下IFNS和IFN相关基因的调控具有抑制作用 | 第60-62页 |
| 5 讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 草鱼P47PHOX和P40PHOX基因的克隆和表达分析 | 第64-89页 |
| 1 前言 | 第64-65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-76页 |
| 2.1 仪器设备 | 第65-66页 |
| 2.2 主要试剂 | 第66页 |
| 2.3 载体和菌株 | 第66-67页 |
| 2.4 草鱼组织RNA提取与CDNA合成 | 第67-68页 |
| 2.5 P47PHOX和P40PHOX CDNA全长序列的扩增与特征分析 | 第68-70页 |
| 2.6 草鱼P47PHOX/P40PHOX基因CDNA全长及预测氨基酸序列特征分析 | 第70-71页 |
| 2.7 草鱼P47PHOX和P40PHOX基因ORF的扩增及真核表达质粒的构建 | 第71-75页 |
| 2.8 草鱼P47PHOX和P40PHOX基因组成型表达模式分析 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-85页 |
| 3.1 草鱼P47PHOX/P40PHOXCDNA全长序列及推导的氨基酸 | 第76-79页 |
| 3.2 草鱼P47PHOX/P40PHOX基因氨基酸序列同其它物种同源性比较 | 第79-83页 |
| 3.3 P3XFLAG-P47PHOX、P3XFLAG-P40PHOX酶切鉴定结果 | 第83-84页 |
| 3.4 草鱼P47PHOX/P40PHOX基因的组成型表达模式分析 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
