交换形成相关基因的RNAi载体构建及转化甘蓝型油菜研究
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 减数分裂 | 第9-14页 |
| 1.1.1 减数分裂的关键时期-减 Ι 前期 | 第9页 |
| 1.1.2 减数分裂联会复合体的形成及其作用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 减数分裂重组过程 | 第10-14页 |
| 1.2 影响交换形成的主要基因及其作用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 ASY1 | 第14页 |
| 1.2.2 FIGL1 | 第14-15页 |
| 1.2.3 MHF1与MHF2 | 第15页 |
| 1.2.4 XRCC2 | 第15页 |
| 1.2.5 MUS81 | 第15-16页 |
| 1.3 RNAi干涉技术 | 第16-19页 |
| 1.3.1 RNAi干涉的机制 | 第16-17页 |
| 1.3.2 RNAi干涉载体的构建 | 第17-19页 |
| 1.4 甘蓝型油菜进化机制及其减数分裂 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 实验材料和方法 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料品种及来源 | 第21页 |
| 2.1.2 实验常用试剂与耗材 | 第21页 |
| 2.1.3 DNA常规合成和测序 | 第21页 |
| 2.1.4 实验所用引物序列 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第22-30页 |
| 2.2.1 干涉载体构建 | 第22-25页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化 | 第25-26页 |
| 2.2.3 DNA提取与检测 | 第26-27页 |
| 2.2.4 RNA提取和反转录 | 第27-29页 |
| 2.2.5 荧光定量PCR | 第29页 |
| 2.2.6 普通细胞学分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-43页 |
| 3.1 干涉载体的构建 | 第30-35页 |
| 3.1.0 目标干涉片段的选择 | 第30-31页 |
| 3.1.1 目的片段扩增 | 第31页 |
| 3.1.2 PCR产物酶切、连接及转化大肠杆菌 | 第31-33页 |
| 3.1.3 RNAi载体酶切检测 | 第33-34页 |
| 3.1.4 农杆菌菌落检测 | 第34-35页 |
| 3.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第35-38页 |
| 3.2.1 甘蓝型油菜遗传转化与再生 | 第35-36页 |
| 3.2.2 再生苗的生长 | 第36-38页 |
| 3.3 转基因植株分子生物学鉴定 | 第38-42页 |
| 3.3.0 转基因植株PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.3.1 幼嫩花蕾的RNA提取与检测 | 第39-40页 |
| 3.3.2 反转录与定量PCR检测 | 第40-42页 |
| 3.4 转基因植株减数分裂染色体行为 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 附录 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
