| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第10-11页 |
| 1.2 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.2.1 鸡的性别决定理论 | 第11-14页 |
| 1.2.2 鸡性别决定中性连锁基因的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.3 miRNAs的相关研究 | 第15-18页 |
| 1.3 目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 试验材料与方法 | 第19-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 样品 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞系和质粒 | 第19页 |
| 2.2 主要仪器、试剂和溶液配制 | 第19-22页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂和试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.2.4 生物信息学分析相关的软件和数据库 | 第22页 |
| 2.3 试验方法 | 第22-39页 |
| 2.3.1 鸡胚样品采集及处理 | 第22页 |
| 2.3.2 总RNA提取 | 第22-24页 |
| 2.3.3 时间表达谱分析 | 第24-28页 |
| 2.3.4 双荧光素酶报告系统验证靶位点 | 第28-33页 |
| 2.3.5 靶基因YY1时间表达谱及E10.5 组织表达分析 | 第33-35页 |
| 2.3.6 miR-2954的超表达与抑制 | 第35-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-56页 |
| 3.1 总RNA的提取及检测 | 第39页 |
| 3.2 miRNAs的时间表达谱分析 | 第39-45页 |
| 3.2.1 雄性显著高表达的miRNAs | 第39-41页 |
| 3.2.2 雄性高表达但性别差异不显著的mi RNAs | 第41-42页 |
| 3.2.3 雌性高表达miRNAs | 第42-44页 |
| 3.2.4 miR-2954的组织表达谱 | 第44-45页 |
| 3.3 靶基因的选择 | 第45-49页 |
| 3.3.1 靶基因预测及功能分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2 候选靶基因YY1和FOXD1的分析 | 第46-49页 |
| 3.4 双荧光素酶报告系统验证靶位点 | 第49-53页 |
| 3.4.1 靶基因YY1与FOXD1的 3’UTR扩增 | 第49-50页 |
| 3.4.2 T1-靶基因 3’UTR重组载体构建及鉴定 | 第50页 |
| 3.4.3 psiCHECKTM2-靶基因 3’UTR重组载体构建及鉴定 | 第50-52页 |
| 3.4.4 双荧光素酶报告系统检测 | 第52-53页 |
| 3.5 YY1在鸡胚中的时间表达谱及E10.5 组织表达谱结果 | 第53-54页 |
| 3.6 miR-2954超表达与抑制 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 Z染色体miRNAs在早期鸡胚及性腺中的表达 | 第56-57页 |
| 4.1.1 Z染色体miRNAs的整体表达 | 第56-57页 |
| 4.1.2 miR-2954的表达 | 第57页 |
| 4.2 miR-2954与靶基因之间的调控关系 | 第57-61页 |
| 4.2.1 miR-2954的靶基因预测 | 第57-58页 |
| 4.2.2 miR-2954与YY1基因的调控关系 | 第58-59页 |
| 4.2.3 miR-2954与FOXD1基因的调控关系 | 第59-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 5.1 本研究所取得的结果 | 第61页 |
| 5.2 本研究的创新点和特色 | 第61页 |
| 5.3 下一步需要研究的问题 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
