中文摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 绪论 | 第13-42页 |
1.1 蛋白质 | 第13-14页 |
1.1.1 蛋白质的结构 | 第13-14页 |
1.1.2 蛋白质的功能 | 第14页 |
1.1.3 蛋白类酶 | 第14页 |
1.2 凝血酶 | 第14-27页 |
1.2.1 凝血酶的四级结构 | 第15页 |
1.2.2 凝血酶的生物学功能 | 第15-17页 |
1.2.3 根据凝血酶的功能建立的检测方法 | 第17页 |
1.2.4 根据凝血酶的结构建立的检测方法 | 第17-25页 |
1.2.4.1 特异性结合凝血酶的适配子 | 第17-19页 |
1.2.4.2 TBA辅助的凝血酶含量的检测 | 第19-25页 |
1.2.4.2.1 比色法检测凝血酶 | 第19-20页 |
1.2.4.2.2 磁弛豫开关法和比色法双重检测凝血酶 | 第20-21页 |
1.2.4.2.3 电化学法检测凝血酶 | 第21-22页 |
1.2.4.2.4 电致发光法检测凝血酶 | 第22-23页 |
1.2.4.2.5 荧光分析法检测凝血酶 | 第23-25页 |
1.2.5 凝血酶辅助的DNA的检测 | 第25-27页 |
1.3 酪氨酸酶 | 第27-35页 |
1.3.1 酪氨酸酶的结构 | 第27-28页 |
1.3.2 酪氨酸酶的生物学功能 | 第28-29页 |
1.3.3 根据酪氨酸酶的结构建立的检测方法 | 第29-30页 |
1.3.4 根据酪氨酸酶的功能建立的检测方法 | 第30-35页 |
1.3.4.1 电化学法检测酪氨酸酶 | 第30-31页 |
1.3.4.2 比色法检测酪氨酸酶 | 第31-32页 |
1.3.4.2.1 邻苯二酚紫-Sn~(4+)复合物检测酪氨酸酶 | 第31页 |
1.3.4.2.2 纳米金颗粒辅助的酪氨酸酶检测 | 第31-32页 |
1.3.4.3 荧光分析法检测酪氨酸酶 | 第32-35页 |
1.3.4.3.1 量子点辅助的酪氨酸酶检测 | 第32-33页 |
1.3.4.3.2 二聚苯乙烯化合物用于酪氨酸酶的检测 | 第33页 |
1.3.4.3.3 花青类化合物用于酪氨酸酶的检测 | 第33-34页 |
1.3.4.3.4 BODIPY类衍生物用于酪氨酸酶的检测 | 第34-35页 |
1.4 本章小结 | 第35页 |
参考文献 | 第35-42页 |
第二章 应用荧光分析法检测凝血酶和酪氨酸酶的课题设计 | 第42-63页 |
2.1 所设计的凝血酶与酪氨酸酶探针的结构式 | 第42-43页 |
2.2 应用荧光分析法检测凝血酶的课题设计 | 第43-51页 |
2.2.1 引言 | 第43页 |
2.2.2 研究背景 | 第43-50页 |
2.2.2.1 聚集促使淬灭效应 | 第43页 |
2.2.2.2 多聚阴离子诱导聚集效应 | 第43-45页 |
2.2.2.3 单链DNA——特殊的多聚阴离子 | 第45-50页 |
2.2.2.3.1 DNA的二级结构 | 第45-46页 |
2.2.2.3.2 单链DNA与荧光多聚阳离子联合用于检测 | 第46-47页 |
2.2.2.3.3 单链DNA与带正电荷的荧光小分子联合用于检测 | 第47-50页 |
2.2.3 选取合适的荧光小分子用于凝血酶蛋白质的检测 | 第50-51页 |
2.2.4 关于凝血酶检测的实验方法设计 | 第51页 |
2.3 应用荧光分析法检测酪氨酸酶的课题设计 | 第51-58页 |
2.3.1 引言 | 第51-52页 |
2.3.2 研究背景 | 第52-54页 |
2.3.2.1 基因导向酶前药治疗策略(GDEPT) | 第52-53页 |
2.3.2.2 关于酪氨酸酶前药策略的应用 | 第53-54页 |
2.3.3 选取合适的荧光小分子用于酪氨酸酶的检测 | 第54-58页 |
2.3.3.1 硝基苯并氧杂恶二唑(NBD)衍生物 | 第55-56页 |
2.3.3.2 6-乙酰基-N-甲基-2-萘胺衍生物 | 第56-58页 |
2.3.4 关于酪氨酸酶检测的实验方法设计 | 第58页 |
参考文献 | 第58-63页 |
第三章 凝血酶荧光探针的合成及其结构鉴定 | 第63-68页 |
3.1 引言 | 第63页 |
3.2 仪器与试剂 | 第63页 |
3.2.1 仪器 | 第63页 |
3.2.2 试剂 | 第63页 |
3.3 实验部分 | 第63-66页 |
3.3.1 化合物1的合成 | 第63-65页 |
3.3.2 化合物2的合成 | 第65-66页 |
3.4 结果与讨论 | 第66-67页 |
3.4.1 关于化合物1的合成 | 第66页 |
3.4.2 关于化合物2的合成 | 第66-67页 |
3.5 本章小结 | 第67页 |
参考文献 | 第67-68页 |
第四章 单链DNA诱导化合物1和2的聚集及化合物1在凝血酶检测中的应用 | 第68-82页 |
4.1 引言 | 第68页 |
4.2 实验仪器及试剂 | 第68-69页 |
4.2.1 仪器 | 第68-69页 |
4.2.2 试剂 | 第69页 |
4.3 实验部分 | 第69-80页 |
4.3.1 化合物1和2被多聚阴离子诱导聚集致荧光淬灭现象的研究 | 第69-73页 |
4.3.1.1 DNA序列(TBA)诱导化合物1聚集效应 | 第69-70页 |
4.3.1.2 TBA诱导化合物2聚集效应 | 第70-71页 |
4.3.1.3 S1核酸酶降解法实验 | 第71-72页 |
4.3.1.4 聚乙烯硫酸盐诱导化合物1聚集效应 | 第72-73页 |
4.3.2 化合物1对TBA的诱导实验 | 第73-75页 |
4.3.2.1 圆二色谱的原理 | 第74页 |
4.3.2.2 圆二色谱考察化合物1对TBA的诱导 | 第74-75页 |
4.3.3 化合物1在水溶液中对凝血酶的检测 | 第75-80页 |
4.3.3.1 化合物1与TBA在检测凝血酶中的应用 | 第75-77页 |
4.3.3.2 凝血酶浓度与荧光强度的线性关系 | 第77-78页 |
4.3.3.3 化合物1与TBA在缓冲溶液中可视化检测凝血酶 | 第78-79页 |
4.3.3.4 对于其它蛋白的选择性实验 | 第79-80页 |
4.4 本章小结 | 第80页 |
参考文献 | 第80-82页 |
第五章 酪氨酸酶荧光探针的合成及其结构鉴定 | 第82-94页 |
5.1 引言 | 第82页 |
5.2 仪器与试剂 | 第82页 |
5.2.1 仪器 | 第82页 |
5.2.2 试剂 | 第82页 |
5.3 实验部分 | 第82-91页 |
5.3.1 化合物3的合成 | 第83页 |
5.3.2 化合物4的合成 | 第83-84页 |
5.3.3 化合物5的合成 | 第84-86页 |
5.3.4 双光子荧光探针ANN(化合物32)的合成 | 第86-87页 |
5.3.5 化合物6的合成 | 第87页 |
5.3.6 化合物7的合成 | 第87-88页 |
5.3.7 其他ANN衍生物的合成 | 第88-91页 |
5.4 结果与讨论 | 第91-92页 |
5.4.1 关于NBD衍生物的合成 | 第91页 |
5.4.2 关于ANN衍生物的合成 | 第91-92页 |
5.5 本章小结 | 第92页 |
参考文献 | 第92-94页 |
第六章 化合物3、6在酪氨酸酶检测中的应用 | 第94-118页 |
6.1 引言 | 第94页 |
6.2 实验仪器及试剂 | 第94-95页 |
6.2.1 仪器 | 第94-95页 |
6.2.2 试剂 | 第95页 |
6.3 实验部分 | 第95-115页 |
6.3.1 化合物3和4对溶液中酪氨酸酶的检测 | 第95-106页 |
6.3.1.1 对比化合物3和4荧光识别酪氨酸酶的能力 | 第95-96页 |
6.3.1.2 化合物3在不同浓度酪氨酸酶氧化下荧光强度的变化 | 第96-100页 |
6.3.1.4 金属离子对化合物3用于酪氨酸酶活性检测的影响 | 第100-101页 |
6.3.1.5 对于其它蛋白的选择性实验 | 第101-102页 |
6.3.1.6 化合物3用于酪氨酸酶活性检测的机理探索 | 第102-105页 |
6.3.1.6.1 化合物3用于酪氨酸酶活性检测的机理的推测 | 第102页 |
6.3.1.6.2 MBTH法检测化合物3在酪氨酸酶氧化后醌的形成 | 第102-104页 |
6.3.1.6.3 HPLC分析化合物3经酪氨酸酶氧化后的产物 | 第104-105页 |
6.3.1.7 化合物3用于与抑制剂作用后的酪氨酸酶活性检测 | 第105-106页 |
6.3.2 化合物6和7对溶液中酪氨酸酶的检测 | 第106-114页 |
6.3.2.1 对比化合物6和7荧光识别酪氨酸酶的能力 | 第106-107页 |
6.3.2.2 化合物6与不同浓度酪氨酸酶反应的随时间变化趋势研究 | 第107-108页 |
6.3.2.3 化合物6用于检测酪氨酸酶活性的最适pH的筛选 | 第108-109页 |
6.3.2.4 金属离子对化合物6用于酪氨酸酶活性检测的影响 | 第109-110页 |
6.3.2.5 对于其它氧化酶的选择性实验 | 第110-111页 |
6.3.2.6 双光子荧光光谱考察酪氨酸酶对化合物6的氧化 | 第111-112页 |
6.3.2.7 化合物6用于酪氨酸酶活性检测的机理探索 | 第112-114页 |
6.3.2.7.1 化合物6用于酪氨酸酶活性检测的机理的推测 | 第112页 |
6.3.2.7.2 MBTH法检测化合物6在酪氨酸酶氧化后醌的形成 | 第112-113页 |
6.3.2.7.3 HPLC分析化合物6经酪氨酸酶氧化后的产物 | 第113-114页 |
6.3.3 化合物6用于细胞内酪氨酸酶活性的检测 | 第114-115页 |
6.3.3.1 细胞培养液中使用试剂的配制 | 第114页 |
6.3.3.2 细胞培养步骤 | 第114页 |
6.3.3.3 化合物6用于细胞内酪氨酸酶活性的检测 | 第114-115页 |
6.4 本章小结 | 第115-116页 |
参考文献 | 第116-118页 |
研究总结 | 第118-119页 |
攻读博士期间发表论文 | 第119-121页 |
致谢 | 第121-122页 |
附录:化合物表征图谱 | 第122-125页 |