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基于凝血酶、酪氨酸酶检测的荧光探针的设计合成及应用

中文摘要第6-7页
Abstract第7-8页
第一章 绪论第13-42页
    1.1 蛋白质第13-14页
        1.1.1 蛋白质的结构第13-14页
        1.1.2 蛋白质的功能第14页
        1.1.3 蛋白类酶第14页
    1.2 凝血酶第14-27页
        1.2.1 凝血酶的四级结构第15页
        1.2.2 凝血酶的生物学功能第15-17页
        1.2.3 根据凝血酶的功能建立的检测方法第17页
        1.2.4 根据凝血酶的结构建立的检测方法第17-25页
            1.2.4.1 特异性结合凝血酶的适配子第17-19页
            1.2.4.2 TBA辅助的凝血酶含量的检测第19-25页
                1.2.4.2.1 比色法检测凝血酶第19-20页
                1.2.4.2.2 磁弛豫开关法和比色法双重检测凝血酶第20-21页
                1.2.4.2.3 电化学法检测凝血酶第21-22页
                1.2.4.2.4 电致发光法检测凝血酶第22-23页
                1.2.4.2.5 荧光分析法检测凝血酶第23-25页
        1.2.5 凝血酶辅助的DNA的检测第25-27页
    1.3 酪氨酸酶第27-35页
        1.3.1 酪氨酸酶的结构第27-28页
        1.3.2 酪氨酸酶的生物学功能第28-29页
        1.3.3 根据酪氨酸酶的结构建立的检测方法第29-30页
        1.3.4 根据酪氨酸酶的功能建立的检测方法第30-35页
            1.3.4.1 电化学法检测酪氨酸酶第30-31页
            1.3.4.2 比色法检测酪氨酸酶第31-32页
                1.3.4.2.1 邻苯二酚紫-Sn~(4+)复合物检测酪氨酸酶第31页
                1.3.4.2.2 纳米金颗粒辅助的酪氨酸酶检测第31-32页
            1.3.4.3 荧光分析法检测酪氨酸酶第32-35页
                1.3.4.3.1 量子点辅助的酪氨酸酶检测第32-33页
                1.3.4.3.2 二聚苯乙烯化合物用于酪氨酸酶的检测第33页
                1.3.4.3.3 花青类化合物用于酪氨酸酶的检测第33-34页
                1.3.4.3.4 BODIPY类衍生物用于酪氨酸酶的检测第34-35页
    1.4 本章小结第35页
    参考文献第35-42页
第二章 应用荧光分析法检测凝血酶和酪氨酸酶的课题设计第42-63页
    2.1 所设计的凝血酶与酪氨酸酶探针的结构式第42-43页
    2.2 应用荧光分析法检测凝血酶的课题设计第43-51页
        2.2.1 引言第43页
        2.2.2 研究背景第43-50页
            2.2.2.1 聚集促使淬灭效应第43页
            2.2.2.2 多聚阴离子诱导聚集效应第43-45页
            2.2.2.3 单链DNA——特殊的多聚阴离子第45-50页
                2.2.2.3.1 DNA的二级结构第45-46页
                2.2.2.3.2 单链DNA与荧光多聚阳离子联合用于检测第46-47页
                2.2.2.3.3 单链DNA与带正电荷的荧光小分子联合用于检测第47-50页
        2.2.3 选取合适的荧光小分子用于凝血酶蛋白质的检测第50-51页
        2.2.4 关于凝血酶检测的实验方法设计第51页
    2.3 应用荧光分析法检测酪氨酸酶的课题设计第51-58页
        2.3.1 引言第51-52页
        2.3.2 研究背景第52-54页
            2.3.2.1 基因导向酶前药治疗策略(GDEPT)第52-53页
            2.3.2.2 关于酪氨酸酶前药策略的应用第53-54页
        2.3.3 选取合适的荧光小分子用于酪氨酸酶的检测第54-58页
            2.3.3.1 硝基苯并氧杂恶二唑(NBD)衍生物第55-56页
            2.3.3.2 6-乙酰基-N-甲基-2-萘胺衍生物第56-58页
        2.3.4 关于酪氨酸酶检测的实验方法设计第58页
    参考文献第58-63页
第三章 凝血酶荧光探针的合成及其结构鉴定第63-68页
    3.1 引言第63页
    3.2 仪器与试剂第63页
        3.2.1 仪器第63页
        3.2.2 试剂第63页
    3.3 实验部分第63-66页
        3.3.1 化合物1的合成第63-65页
        3.3.2 化合物2的合成第65-66页
    3.4 结果与讨论第66-67页
        3.4.1 关于化合物1的合成第66页
        3.4.2 关于化合物2的合成第66-67页
    3.5 本章小结第67页
    参考文献第67-68页
第四章 单链DNA诱导化合物1和2的聚集及化合物1在凝血酶检测中的应用第68-82页
    4.1 引言第68页
    4.2 实验仪器及试剂第68-69页
        4.2.1 仪器第68-69页
        4.2.2 试剂第69页
    4.3 实验部分第69-80页
        4.3.1 化合物1和2被多聚阴离子诱导聚集致荧光淬灭现象的研究第69-73页
            4.3.1.1 DNA序列(TBA)诱导化合物1聚集效应第69-70页
            4.3.1.2 TBA诱导化合物2聚集效应第70-71页
            4.3.1.3 S1核酸酶降解法实验第71-72页
            4.3.1.4 聚乙烯硫酸盐诱导化合物1聚集效应第72-73页
        4.3.2 化合物1对TBA的诱导实验第73-75页
            4.3.2.1 圆二色谱的原理第74页
            4.3.2.2 圆二色谱考察化合物1对TBA的诱导第74-75页
        4.3.3 化合物1在水溶液中对凝血酶的检测第75-80页
            4.3.3.1 化合物1与TBA在检测凝血酶中的应用第75-77页
            4.3.3.2 凝血酶浓度与荧光强度的线性关系第77-78页
            4.3.3.3 化合物1与TBA在缓冲溶液中可视化检测凝血酶第78-79页
            4.3.3.4 对于其它蛋白的选择性实验第79-80页
    4.4 本章小结第80页
    参考文献第80-82页
第五章 酪氨酸酶荧光探针的合成及其结构鉴定第82-94页
    5.1 引言第82页
    5.2 仪器与试剂第82页
        5.2.1 仪器第82页
        5.2.2 试剂第82页
    5.3 实验部分第82-91页
        5.3.1 化合物3的合成第83页
        5.3.2 化合物4的合成第83-84页
        5.3.3 化合物5的合成第84-86页
        5.3.4 双光子荧光探针ANN(化合物32)的合成第86-87页
        5.3.5 化合物6的合成第87页
        5.3.6 化合物7的合成第87-88页
        5.3.7 其他ANN衍生物的合成第88-91页
    5.4 结果与讨论第91-92页
        5.4.1 关于NBD衍生物的合成第91页
        5.4.2 关于ANN衍生物的合成第91-92页
    5.5 本章小结第92页
    参考文献第92-94页
第六章 化合物3、6在酪氨酸酶检测中的应用第94-118页
    6.1 引言第94页
    6.2 实验仪器及试剂第94-95页
        6.2.1 仪器第94-95页
        6.2.2 试剂第95页
    6.3 实验部分第95-115页
        6.3.1 化合物3和4对溶液中酪氨酸酶的检测第95-106页
            6.3.1.1 对比化合物3和4荧光识别酪氨酸酶的能力第95-96页
            6.3.1.2 化合物3在不同浓度酪氨酸酶氧化下荧光强度的变化第96-100页
            6.3.1.4 金属离子对化合物3用于酪氨酸酶活性检测的影响第100-101页
            6.3.1.5 对于其它蛋白的选择性实验第101-102页
            6.3.1.6 化合物3用于酪氨酸酶活性检测的机理探索第102-105页
                6.3.1.6.1 化合物3用于酪氨酸酶活性检测的机理的推测第102页
                6.3.1.6.2 MBTH法检测化合物3在酪氨酸酶氧化后醌的形成第102-104页
                6.3.1.6.3 HPLC分析化合物3经酪氨酸酶氧化后的产物第104-105页
            6.3.1.7 化合物3用于与抑制剂作用后的酪氨酸酶活性检测第105-106页
        6.3.2 化合物6和7对溶液中酪氨酸酶的检测第106-114页
            6.3.2.1 对比化合物6和7荧光识别酪氨酸酶的能力第106-107页
            6.3.2.2 化合物6与不同浓度酪氨酸酶反应的随时间变化趋势研究第107-108页
            6.3.2.3 化合物6用于检测酪氨酸酶活性的最适pH的筛选第108-109页
            6.3.2.4 金属离子对化合物6用于酪氨酸酶活性检测的影响第109-110页
            6.3.2.5 对于其它氧化酶的选择性实验第110-111页
            6.3.2.6 双光子荧光光谱考察酪氨酸酶对化合物6的氧化第111-112页
            6.3.2.7 化合物6用于酪氨酸酶活性检测的机理探索第112-114页
                6.3.2.7.1 化合物6用于酪氨酸酶活性检测的机理的推测第112页
                6.3.2.7.2 MBTH法检测化合物6在酪氨酸酶氧化后醌的形成第112-113页
                6.3.2.7.3 HPLC分析化合物6经酪氨酸酶氧化后的产物第113-114页
        6.3.3 化合物6用于细胞内酪氨酸酶活性的检测第114-115页
            6.3.3.1 细胞培养液中使用试剂的配制第114页
            6.3.3.2 细胞培养步骤第114页
            6.3.3.3 化合物6用于细胞内酪氨酸酶活性的检测第114-115页
    6.4 本章小结第115-116页
    参考文献第116-118页
研究总结第118-119页
攻读博士期间发表论文第119-121页
致谢第121-122页
附录:化合物表征图谱第122-125页

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