| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 海藻糖的简介及研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 海藻糖的简介 | 第10页 |
| 1.1.2 海藻糖的生产制备 | 第10-11页 |
| 1.2 海藻糖合酶的简介及研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 海藻糖合酶的简介及来源 | 第11-12页 |
| 1.2.2 海藻糖合酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第13-18页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统的简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 外源蛋白质在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第15-17页 |
| 1.3.4 枯草芽孢杆菌的蛋白质分泌过程 | 第17-18页 |
| 1.4 课题的研究背景及主要研究内容 | 第18-20页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究主要内容 | 第19-20页 |
| 第2章 海藻糖合酶枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建 | 第20-36页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2.2.4 引物合成与测序 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.3.1 实验流程 | 第23-24页 |
| 2.3.2 构建信号肽筛选载体 | 第24-29页 |
| 2.3.3 酶切与连接 | 第29-31页 |
| 2.3.4 重组表达载体的转化与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-34页 |
| 2.4.1 目的基因片段的扩增 | 第32-34页 |
| 2.4.2 阳性重组子的筛选及鉴定 | 第34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-36页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌Sec途径信号肽的克隆及分泌表达tres的研究 | 第36-52页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第36-37页 |
| 3.2.2 仪器与试剂 | 第37页 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| 3.2.4 引物合成与测序 | 第38-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-47页 |
| 3.3.1 实验流程 | 第40-41页 |
| 3.3.2 源于B. subtilis信号肽基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.3 酶切与连接 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组表达载体的转化与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.5 重组质粒的提取及浓缩 | 第44-45页 |
| 3.3.6 电转化至B. subtilis WB800N | 第45页 |
| 3.3.7 阳性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.8 海藻糖合酶的胞外分泌表达及酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-50页 |
| 3.4.1 目的基因片段的扩增 | 第47-48页 |
| 3.4.2 重组质粒的电转化及其鉴定 | 第48页 |
| 3.4.3 海藻糖合酶的胞外分泌表达及酶活测定 | 第48-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第4章 P_(aprE)启动子对tres分泌的影响 | 第52-62页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第52页 |
| 4.2.2 仪器与试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 主要溶液的配制 | 第52-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-58页 |
| 4.3.1 实验流程 | 第54页 |
| 4.3.2 源于B. subtilis强启动子P_(aprE)的克隆 | 第54-55页 |
| 4.3.3 酶切与连接 | 第55-56页 |
| 4.3.4 重组表达载体的转化与鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.5 重组质粒的提取及浓缩 | 第57页 |
| 4.3.6 电转化至B. subtilis WB800N | 第57页 |
| 4.3.7 阳性克隆的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.8 海藻糖合酶的胞外分泌表达及酶活测定 | 第58页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第58-60页 |
| 4.4.1 重组质粒的电转化及其鉴定 | 第58-59页 |
| 4.4.2 海藻糖合酶的胞外分泌表达及酶活测定 | 第59-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-62页 |
| 第5章 重组菌WB800N(pHT01-SP_(NprE)-P_(aprE)-tres)摇瓶发酵条件优化 | 第62-70页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 材料与方法 | 第62页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第62页 |
| 5.2.2 仪器与试剂 | 第62页 |
| 5.2.3 主要溶液的配制 | 第62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 5.3.1 种子培养方法 | 第62-63页 |
| 5.3.2 发酵培养方法 | 第63页 |
| 5.3.3 重组菌生长浓度的测定 | 第63页 |
| 5.3.4 重组海藻糖合酶酶活力定义及测定 | 第63页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 5.4.1 发酵时间的选择 | 第63-64页 |
| 5.4.2 碳源优化 | 第64-66页 |
| 5.4.3 氮源优化 | 第66-68页 |
| 5.4.4 金属离子优化 | 第68-69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第6章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 6.1 结论 | 第70页 |
| 6.2 创新点 | 第70-71页 |
| 6.3 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第82页 |
