| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1. 血小板与血小板减少症 | 第10页 |
| 2 促血小板生成素 | 第10-14页 |
| 2.1 促血小板生成素 | 第10-11页 |
| 2.2 TPO基因 | 第11页 |
| 2.3 TPO分子结构 | 第11页 |
| 2.4 第一代TPO药物 | 第11-12页 |
| 2.5 TPO肽类模拟物药物及融合蛋白 | 第12-14页 |
| 3. 不同的外源蛋白表达系统 | 第14-16页 |
| 3.1 原核表达系统 | 第14-15页 |
| 3.2 真核表达系统 | 第15-16页 |
| 3.2.1 丝状真菌表达系统 | 第15页 |
| 3.2.2 昆虫杆状病毒载体表达系统 | 第15页 |
| 3.2.3 哺乳动物细胞细胞表达系统 | 第15-16页 |
| 4 酵母表达系统 | 第16-22页 |
| 4.1 酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 4.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-18页 |
| 4.3 巴斯德毕赤酵母中甲醇的同化和异化代谢过程 | 第18-21页 |
| 4.3.1 AOX1启动子 | 第18-20页 |
| 4.3.2 AOX1突变体的表型 | 第20-21页 |
| 4.4 巴斯德毕赤酵母作为外源蛋白表达系统的优点 | 第21-22页 |
| 4.5 巴斯德毕赤酵母的发酵研究 | 第22页 |
| 5. 生物反应器及其操控维护-发酵罐及微生物发酵过程 | 第22-23页 |
| 6. 立题依据 | 第23-25页 |
| 第二章 不同酵母工程菌株的发酵培养 | 第25-39页 |
| 1. 前言 | 第25页 |
| 2. 材料和试剂 | 第25-27页 |
| 2.1 生物材料 | 第25页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第25-27页 |
| 2.2.1 相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.3 试验仪器 | 第27页 |
| 3 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.1 种子的制备 | 第27页 |
| 3.2 发酵罐的灭菌 | 第27-29页 |
| 3.2.1 空气过滤器及空气管路的在线灭菌 | 第28页 |
| 3.2.2 发酵罐空消 | 第28页 |
| 3.2.3 加入培养基 | 第28页 |
| 3.2.4 发酵罐实消 | 第28-29页 |
| 3.3 接种 | 第29页 |
| 3.4 取样 | 第29页 |
| 3.5 发酵过程控制 | 第29-31页 |
| 3.5.1 甘油补料累积生物量阶段 | 第30页 |
| 3.5.2 甲醇诱导HSA-TMP蛋白的合成 | 第30-31页 |
| 4 实验结果与分析 | 第31-37页 |
| 4.1 不同酵母工程菌的发酵结果 | 第31-36页 |
| 4.2 不同菌株的TMP-HSA融合蛋白的表达量和活性 | 第36-37页 |
| 5. 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 巴斯德毕赤酵母11~-3菌株发酵条件的优化 | 第39-43页 |
| 1. 前言 | 第39页 |
| 2. 材料和试剂 | 第39页 |
| 2.1 生物材料 | 第39页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第39页 |
| 2.3 主要仪器 | 第39页 |
| 3 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.1 种子的最佳接种时间 | 第39-40页 |
| 3.2 摇瓶优选BSM发酵培养基表达最适pH条件 | 第40页 |
| 3.3 大规模发酵用基础盐培养基中添加不同成分后对蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 4 实验结果与分析 | 第41-43页 |
| 4.1 最佳接种时间点 | 第41页 |
| 4.2 BSM最佳pH的实验 | 第41-42页 |
| 4.3 发酵基础盐培养基添加物实验 | 第42-43页 |
| 第四章 HSA-TMP融合蛋白的中试发酵验证 | 第43-48页 |
| 1. 前言 | 第43页 |
| 2. 材料和试剂 | 第43页 |
| 2.1 生物材料 | 第43页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第43页 |
| 2.3 主要仪器 | 第43页 |
| 3 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.1 种子的制备 | 第43页 |
| 3.2 发酵罐的灭菌和参数的调控 | 第43-46页 |
| 4 实验结果与分析 | 第46-48页 |
| 4.1 11~ | 第46页 |
| 4.2 11~ | 第46-47页 |
| 4.3 11~ | 第47-48页 |
| 第五章 结论与展望 | 第48-50页 |
| 1. 结论 | 第48-49页 |
| 1.1 第一阶段发酵结论 | 第48页 |
| 1.2 发酵优化结论 | 第48-49页 |
| 1.3 第二阶段中试发酵结论 | 第49页 |
| 2. 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
