| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 果胶简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 果胶结构和存在形式 | 第10-11页 |
| 1.1.2 果胶物质的性质 | 第11页 |
| 1.2 果胶的来源和用途 | 第11-12页 |
| 1.2.1 果胶生产的原材料 | 第11-12页 |
| 1.2.2 果胶的用途 | 第12页 |
| 1.3 果胶的生产方法 | 第12-13页 |
| 1.4 原果胶酶简介 | 第13-16页 |
| 1.4.1 几种常见的原果胶酶 | 第13-15页 |
| 1.4.1.1 内切聚半乳糖醛酸酶 | 第13页 |
| 1.4.1.2 果胶(酸)裂解酶 | 第13-14页 |
| 1.4.1.3 果胶酯酶 | 第14页 |
| 1.4.1.4 聚阿拉伯糖苷酶 | 第14页 |
| 1.4.1.5 聚鼠李半乳糖醛酸酶 | 第14-15页 |
| 1.4.2 原果胶酶的分类和作用机制 | 第15-16页 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 | 第16页 |
| 1.6 本课题的主要内容 | 第16-17页 |
| 第2章 菌种的筛选 | 第17-25页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.2.1 试剂 | 第17-18页 |
| 2.2.2 主要设备和仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.3 菌种来源 | 第19页 |
| 2.2.4 培养基 | 第19页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.5.1 菌种筛选 | 第19页 |
| 2.2.5.2 原果胶的制备 | 第19页 |
| 2.2.5.3 原果胶酶酶活测定方法 | 第19-20页 |
| 2.2.5.4 菌种鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第21-24页 |
| 2.3.1 原果胶酶标准曲线 | 第21-22页 |
| 2.3.2 菌种筛选 | 第22-23页 |
| 2.3.3 菌种鉴定 | 第23-24页 |
| 2.4 本章小结 | 第24-25页 |
| 第3章 发酵条件的优化 | 第25-40页 |
| 3.1 引言 | 第25页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第25-28页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 3.2.2 菌种 | 第26页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 3.2.3.1 实验流程图 | 第26-27页 |
| 3.2.3.2 酶活测定方法 | 第27-28页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第28-39页 |
| 3.3.1 单因素优化 | 第28-34页 |
| 3.3.1.1 培养基成份的优化 | 第28-31页 |
| 3.3.1.2 培养条件的影响 | 第31-34页 |
| 3.3.2 BBD设计结果和响应面分析 | 第34-39页 |
| 3.3.2.1 BBD设计结果 | 第34-36页 |
| 3.3.2.2 响应面分析 | 第36-39页 |
| 3.3.3 Aspergillus oryzae PO的原果胶酶成份分析 | 第39页 |
| 3.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 基因的克隆和表达 | 第40-61页 |
| 4.1 引言 | 第40-41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-43页 |
| 4.2.1 主要菌株和质粒 | 第41页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第41页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第41-43页 |
| 4.2.3.1 生物试剂 | 第41-42页 |
| 4.2.3.2 试剂和培养基的配制 | 第42-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-52页 |
| 4.3.1 聚半乳糖醛酸酶基因的克隆 | 第43页 |
| 4.3.2 DNA凝胶回收 | 第43页 |
| 4.3.3 重叠PCR克隆目的基因 | 第43-45页 |
| 4.3.4 目的基因与克隆载体的链接 | 第45-46页 |
| 4.3.5 重组质粒的抽提 | 第46-47页 |
| 4.3.6 聚半乳糖醛酸酶重组表达载体的构建 | 第47页 |
| 4.3.7 转化大肠杆菌,筛选重组子 | 第47-48页 |
| 4.3.8 质粒线性化 | 第48页 |
| 4.3.9 毕赤酵母GS115感受态的制备 | 第48页 |
| 4.3.10 电转 | 第48-49页 |
| 4.3.11 筛选转化子的遗传霉素抗性 | 第49页 |
| 4.3.12 菌落PCR的验证 | 第49页 |
| 4.3.13 目的基因的表达 | 第49-50页 |
| 4.3.14 重组聚半乳糖醛酸酶的纯化 | 第50页 |
| 4.3.15 考马斯亮蓝法测定蛋白含量 | 第50页 |
| 4.3.16 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第50-51页 |
| 4.3.17 重组聚半乳糖醛酸酶酶学性质的研究 | 第51-52页 |
| 4.3.17.1 重组PGase的最适温度和温度的稳定性性 | 第51页 |
| 4.3.17.2 重组PGPO的最适pH和pH的稳定性 | 第51页 |
| 4.3.17.3 金属离子对重组PGPO的影响 | 第51页 |
| 4.3.17.4 表面活性剂对重组PGPO的影响 | 第51页 |
| 4.3.17.5 重组PGPO动力学参数的测定 | 第51-52页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第52-60页 |
| 4.4.1 pgaPO基因的克隆 | 第52页 |
| 4.4.2 目的基因与克隆载体的连接 | 第52-53页 |
| 4.4.3 重组质粒pgaPO-9K的线性化 | 第53页 |
| 4.4.4 SDS-PAGE蛋白电泳分析诱导产物 | 第53-54页 |
| 4.4.5 蛋白标准曲线的绘制 | 第54-55页 |
| 4.4.6 重组PGPO的纯化 | 第55-56页 |
| 4.4.7 酶学性质的研究 | 第56-60页 |
| 4.4.7.1 最适温度和温度的稳定性 | 第56-57页 |
| 4.4.7.2 最适pH和pH的稳定性 | 第57-59页 |
| 4.4.7.3 金属离子和表面活性剂对重组PGPO的影响 | 第59-60页 |
| 4.4.7.4 动力学参数的测定 | 第60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
