缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
前言 | 第15-16页 |
文献回顾 | 第16-27页 |
实验一 自噬与鼻咽癌转移的相关性研究 | 第27-45页 |
1 材料 | 第27-30页 |
1.1 细胞株 | 第27页 |
1.2 细胞培养试剂 | 第27页 |
1.3 qRT- PCR检测试剂 | 第27-28页 |
1.4 Western Blot试剂 | 第28页 |
1.5 细胞检测试剂及耗材 | 第28-29页 |
1.6 仪器设备 | 第29-30页 |
1.7 主要试剂配制 | 第30页 |
2 方法 | 第30-37页 |
2.1 细胞培养 | 第30页 |
2.2 细胞传代 | 第30-31页 |
2.3 细胞冻存 | 第31页 |
2.4 细胞复苏 | 第31页 |
2.5 细胞照射 | 第31页 |
2.6 CCK-8 法检测照射对细胞增殖影响 | 第31-32页 |
2.7 qRT-PCR检测细胞自噬相关基因的表达 | 第32-33页 |
2.8 免疫荧光检测细胞自噬 | 第33-34页 |
2.9 激光共聚焦显微镜检测细胞自噬 | 第34页 |
2.10 透射电镜检测自噬泡 | 第34页 |
2.11 Western Blot检测细胞自噬和转移基因相关蛋白的表达 | 第34-36页 |
2.12 细胞划痕实验 | 第36页 |
2.13 Transwell实验检测细胞侵袭能力 | 第36-37页 |
2.14 统计学方法 | 第37页 |
3 结果 | 第37-43页 |
3.1 鼻咽癌细胞模型的最佳照射剂量筛选 | 第37-38页 |
3.2 鼻咽癌细胞转移能力的验证 | 第38-39页 |
3.3 高低转移潜能鼻咽癌细胞系的自噬水平研究 | 第39-43页 |
4 讨论 | 第43-45页 |
实验二 MAZ基因在鼻咽癌自噬和转移中的作用研究 | 第45-57页 |
1 材料 | 第45页 |
1.1 主要试剂同实验一 | 第45页 |
1.2 主要设备同实验一 | 第45页 |
2 方法 | 第45-47页 |
2.1 慢病毒转染细胞 | 第45-46页 |
2.2 qRT-PCR检测细胞MAZ及自噬基因mRNA表达含量 | 第46页 |
2.3 免疫荧光检测下调MAZ后细胞的自噬 | 第46页 |
2.4 激光共聚焦检测下调MAZ后细胞的自噬流 | 第46页 |
2.5 透射电镜检测下调MAZ后细胞的自噬泡 | 第46页 |
2.6 Western Blot检测下调MAZ后细胞的自噬和转移基因相关蛋白的表达 | 第46页 |
2.7 细胞划痕实验检测下调MAZ后细胞的迁移能力 | 第46页 |
2.8 Transwell实验检测下调MAZ后细胞的迁移和侵袭能力 | 第46-47页 |
2.9 CCK-8 法检测下调MAZ后细胞的增殖情况 | 第47页 |
2.10 统计学方法 | 第47页 |
3 结果 | 第47-55页 |
3.1 MAZ基因的表达水平检测 | 第47-48页 |
3.2 成功构建MAZ下调的稳定细胞株 | 第48-49页 |
3.3 MAZ的表达水平和鼻咽癌细胞自噬水平的关系研究 | 第49-52页 |
3.4 MAZ和鼻咽癌细胞转移关系的研究 | 第52-54页 |
3.5 MAZ促进鼻咽癌细胞的增殖 | 第54-55页 |
4 讨论 | 第55-57页 |
实验三 AKT/MAZ/C-MYC在介导自噬抑制促进鼻咽癌转移中的作用研究 | 第57-74页 |
1 材料 | 第57-58页 |
1.1 主要试剂同实验一 | 第57页 |
1.2 主要设备同实验一 | 第57-58页 |
2 方法 | 第58-59页 |
2.1 Co-IP检测MAZ与c-Myc,MAZ与mTOR相互作用 | 第58页 |
2.2 激光共聚焦检测c-Myc及PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂对细胞自噬流的影响 | 第58-59页 |
2.3 透射电镜检测c-Myc及PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂对细胞自噬的影响 | 第59页 |
2.4 Western Blot检测c-Myc及PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂对细胞自噬和转移基因蛋白的影响 | 第59页 |
2.5 划痕实验检测c-Myc及PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂对细胞迁移能力的影响 | 第59页 |
2.6 Transwell实验检测c-Myc及PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂对细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第59页 |
2.7 统计学方法 | 第59页 |
3 结果 | 第59-72页 |
3.1 MAZ与c-Myc相互作用抑制鼻咽癌细胞自噬 | 第59-62页 |
3.2 c-Myc和鼻咽癌细胞的转移的关系研究 | 第62-64页 |
3.3 PI3K/AKT信号对MAZ/c-Myc的调控作用 | 第64-66页 |
3.4 MAZ主要通过mTORC1途径抑制鼻咽癌细胞自噬促进其转移 | 第66-72页 |
4 讨论 | 第72-74页 |
小结 | 第74-75页 |
参考文献 | 第75-86页 |
附录 | 第86-87页 |
个人简历和研究成果 | 第87-88页 |
致谢 | 第88页 |