| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 真菌毒素的研究现状 | 第11页 |
| 1.2 小麦赤霉病与真菌毒素 | 第11-14页 |
| 1.2.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 | 第12-13页 |
| 1.2.2 玉米赤霉烯酮 | 第13-14页 |
| 1.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的检测方法 | 第14-17页 |
| 1.3.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测方法 | 第14-16页 |
| 1.3.2 玉米赤霉烯酮的检测方法 | 第16-17页 |
| 1.4 scFv的研究进展 | 第17-24页 |
| 1.4.1 单链抗体的设计和构建 | 第18-20页 |
| 1.4.2 scFv融合蛋白的构建 | 第20-21页 |
| 1.4.3 单链抗体的表达 | 第21-22页 |
| 1.4.4 单链抗体的应用 | 第22-24页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 培养基及试剂 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 质粒DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.2 DNA片段回收 | 第27页 |
| 2.2.3 感受态细胞制备及转化 | 第27-29页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| 2.2.6 蛋白诱导表达及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.7 ELISA检测禾谷镰刀菌细胞壁蛋白 | 第31页 |
| 2.2.8 Western blot检测目的蛋白 | 第31-32页 |
| 2.2.9 酵母表达载体的构建与转化 | 第32-33页 |
| 2.2.10 多拷贝数插入转化子的筛选 | 第33页 |
| 2.2.11 重组酵母的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.12 诱导表达阳性转化子 | 第33-34页 |
| 2.2.13 酵母总RNA和cDNA的获得 | 第34-35页 |
| 2.2.14 引物 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-61页 |
| 3.1 单链抗体基因的设计与合成 | 第38-40页 |
| 3.1.1 抗ZEN scFv重链的合成 | 第39-40页 |
| 3.1.2 抗ZEN scFv轻链和抗DON scFv重链、轻链的合成 | 第40页 |
| 3.2 原核表达纯化和功能鉴定 | 第40-55页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.2 原核蛋白表达 | 第43-45页 |
| 3.2.3 原核表达蛋白的功能鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.4 scFv和碱性磷酸酶融合蛋白间Linker的构建与表达 | 第46-51页 |
| 3.2.5. 融合蛋白活性鉴定和纯化 | 第51-53页 |
| 3.2.6 有无Linker融合蛋白表达量分析 | 第53-55页 |
| 3.3 酵母表达载体pPICscFvAP的构建与表达 | 第55-61页 |
| 3.3.1 PCR扩增单链抗体基因 | 第55页 |
| 3.3.2 真核表达pPICscFvAP系列载体的构建与鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.3 多拷贝数插入转化子的筛选 | 第56页 |
| 3.3.4 PCR快速鉴定阳性克隆 | 第56-57页 |
| 3.3.5 转基因毕赤酵母总RNA的提取以及RT-PCR分析 | 第57-59页 |
| 3.3.6 酵母诱导培养后SDS-PAGE检测目的蛋白质 | 第59-60页 |
| 3.3.7 Western blot检测外源基因的表达 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
