| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-24页 |
| 1.1 问题的提出 | 第16-17页 |
| 1.2 泰乐菌素和替米考星的理化性质、代谢及残留 | 第17-20页 |
| 1.3 泰乐菌素和替米考星残留检测研究现状 | 第20-22页 |
| 1.4 研究的内容和目的意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 药品与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.3 试验动物及细胞 | 第26页 |
| 2.4 试液配制 | 第26-28页 |
| 2.5 人工抗原合成与鉴定 | 第28-32页 |
| 2.5.1 DES | 第28页 |
| 2.5.2 OMT | 第28-29页 |
| 2.5.3 DES(OMT)-ADH-BSA(OVA) | 第29-30页 |
| 2.5.4 DES(OMT)-AOAA-BSA(OVA) | 第30-31页 |
| 2.5.5 OMT-HBA-BSA(OVA) | 第31-32页 |
| 2.6 小鼠免疫及血清抗体效价监测 | 第32-33页 |
| 2.6.1 ELISA测定程序 | 第32页 |
| 2.6.2 小鼠免疫及血清抗体水平监测 | 第32-33页 |
| 2.7 杂交瘤细胞株的建立 | 第33-37页 |
| 2.7.1 细胞复苏与冻存 | 第33页 |
| 2.7.2 传代细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.7.3 饲养细胞的制备 | 第34页 |
| 2.7.4 SP2/0骨髓瘤细胞的活化及制备 | 第34页 |
| 2.7.5 免疫鼠脾脏B淋巴细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.7.6 细胞融合 | 第35页 |
| 2.7.7 杂交瘤细胞的选择性培养 | 第35页 |
| 2.7.8 杂交瘤细胞的筛选 | 第35-36页 |
| 2.7.9 杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)及细胞株的建立 | 第36页 |
| 2.7.10 杂交瘤细胞染色体计数 | 第36-37页 |
| 2.8 单克隆抗体制备及抗原抗体稳定性考察 | 第37-38页 |
| 2.8.1 抗体制备 | 第37页 |
| 2.8.2 抗体效价测定 | 第37页 |
| 2.8.3 抗体灵敏度测定 | 第37页 |
| 2.8.4 单克隆抗体亚型鉴定 | 第37页 |
| 2.8.5 杂交瘤细胞分泌抗体稳定性检查 | 第37-38页 |
| 2.9 ELISA检测方法的建立 | 第38-40页 |
| 2.9.1 ELISA检测条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.9.2 标准曲线的建立及评价 | 第39-40页 |
| 2.10 ELISA方法对组织样品的检测及考核 | 第40-41页 |
| 2.10.1 样品的处理 | 第40页 |
| 2.10.2 Cut-off值测定 | 第40页 |
| 2.10.3 组织最低检测限和定量限 | 第40页 |
| 2.10.4 添加回收率和精密度试验 | 第40-41页 |
| 2.10.5 与仪器方法比对试验 | 第41页 |
| 2.10.6 动物喂养试验 | 第41页 |
| 2.11 试剂盒组装 | 第41-42页 |
| 2.12 试剂盒加速稳定性试验 | 第42-43页 |
| 2.12.1 试剂盒主要组分的加速稳定性试验 | 第42页 |
| 2.12.2 试剂盒的加速稳定性试验 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-67页 |
| 3.1 人工抗原 | 第43-46页 |
| 3.1.1 DES结构表征 | 第43-44页 |
| 3.1.2 OMT结构表征 | 第44-45页 |
| 3.1.3 免疫原及包被原结构表征 | 第45-46页 |
| 3.2 免疫鼠血清抗体效价监测 | 第46-47页 |
| 3.3 杂交瘤细胞 | 第47-49页 |
| 3.3.1 杂交瘤细胞株建立 | 第47-48页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞染色体计数 | 第48-49页 |
| 3.4 单克隆抗体制备及考核 | 第49-52页 |
| 3.4.1 单克隆抗体制备 | 第49页 |
| 3.4.2 各细胞株单克隆抗体效价 | 第49页 |
| 3.4.3 各细胞株单克隆抗体灵敏度 | 第49-50页 |
| 3.4.4 单克隆抗体亚型 | 第50页 |
| 3.4.5 杂交瘤细胞稳定性 | 第50-51页 |
| 3.4.6 人工抗原稳定性 | 第51-52页 |
| 3.4.7 抗体稳定性 | 第52页 |
| 3.5 ELISA检测方法 | 第52-57页 |
| 3.5.1 ELISA检测条件的优化 | 第52-54页 |
| 3.5.2 标准曲线的建立及评价 | 第54-57页 |
| 3.6 ELISA方法对组织样品的检测及考核 | 第57-61页 |
| 3.6.1 Cut-off值 | 第57页 |
| 3.6.2 组织最低检测限和定量限 | 第57-58页 |
| 3.6.3 组织添加回收率 | 第58页 |
| 3.6.4 与仪器方法的比对 | 第58-60页 |
| 3.6.5 实际组织样品测定 | 第60-61页 |
| 3.7 试剂盒组装 | 第61-63页 |
| 3.7.1 试剂盒提供的材料 | 第61页 |
| 3.7.2 试剂盒中未提供但需要的材料 | 第61页 |
| 3.7.3 工作液配制 | 第61-62页 |
| 3.7.4 样品处理 | 第62页 |
| 3.7.5 测定程序 | 第62-63页 |
| 3.7.6 结果判定 | 第63页 |
| 3.8 试剂盒的加速稳定性 | 第63-67页 |
| 3.8.1 试剂盒主要组分的加速稳定性 | 第63-64页 |
| 3.8.2 试剂盒的加速稳定性 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67-77页 |
| 4.1 人工抗原的合成 | 第67-71页 |
| 4.1.1 半抗原设计对抗体性能的影响 | 第67-69页 |
| 4.1.2 交联臂及偶联比对人工抗原的影响 | 第69-70页 |
| 4.1.3 人工抗原设计原则 | 第70-71页 |
| 4.2 单克隆抗体的优缺点 | 第71-72页 |
| 4.3 细胞融合筛选 | 第72-73页 |
| 4.4 最佳ELISA反应条件的确定 | 第73-74页 |
| 4.5 ELISA方法检测泰乐菌素和替米考星残留的先进性和可靠性 | 第74页 |
| 4.6 试剂盒主要组成成分的稳定性 | 第74-75页 |
| 4.7 试剂盒需要改进的地方 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 6 文献综述:ELISA在兽药残留分析中的应用 | 第78-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附录 | 第101-122页 |
| 附录Ⅰ——作者简介 | 第101-102页 |
| 附录Ⅱ——附图 | 第102-105页 |
| 附录Ⅲ——原始数据 | 第105-120页 |
| 附录Ⅳ——细胞成活证明 | 第120页 |
| 附录Ⅴ——专利受理证明 | 第120-122页 |
