| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-19页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 孕酮受体的分类 | 第14-17页 |
| ·肾上腺皮质抗原（IZA） | 第14页 |
| ·孕酮膜受体（mPR） | 第14-15页 |
| ·酵母Dap1p 蛋白 | 第15页 |
| ·VemaA 腹中线抗原 | 第15页 |
| ·凝血酶相关孕酮受体 Hpr6 | 第15-16页 |
| ·孕酮受体膜元件1 | 第16-17页 |
| ·孕酮受体膜元件2 | 第17页 |
| 2. 孕酮受体膜元件 2 的结构和功能 | 第17-18页 |
| 3. 展望 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方案 | 第19-21页 |
| 1. 实验的目的和意义 | 第19页 |
| 2. 研究内容 | 第19-20页 |
| 3. 实验流程 | 第20-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-29页 |
| 1. 序列与生物信息学分析工具 | 第21页 |
| ·序列 | 第21页 |
| ·工具和软件 | 第21页 |
| 2. 方法 | 第21-22页 |
| ·PGRMC2 基因的获得 | 第21-22页 |
| ·PGRMC2 基因的序列分析 | 第22页 |
| 3. 结果 | 第22-27页 |
| ·PGRMC2 基因序列 | 第22-23页 |
| ·PGRMC2 的疏水性 | 第23页 |
| ·PGRMC2 蛋白功能区域预测 | 第23页 |
| ·PGRMC2 蛋白跨膜区预测 | 第23-24页 |
| ·信号肽预测 | 第24页 |
| ·PGRMC2 蛋白的定位预测 | 第24-25页 |
| ·PGRMC2 亚细胞定位预测 | 第25页 |
| ·PGRMC2 氨基酸序列同源性比对 | 第25-26页 |
| ·PGRMC2 二级结构预测 | 第26页 |
| ·PGRMC2 高级结构的预测 | 第26-27页 |
| ·PGRMC2 同源蛋白进化树的构建 | 第27页 |
| 4. 讨论 | 第27-29页 |
| 第四章 家蚕PGRMC2 基因的克隆及鉴定 | 第29-35页 |
| 1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·材料与设备 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-32页 |
| ·重组表达质粒的构建策略 | 第30页 |
| ·质粒提取 | 第30页 |
| ·PCR 扩增的引物设计 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物与pET-28a 载体的双酶切 | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·Rosseta (DE3)感受态细胞的制备（CaC1 _2 法） | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第32页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第32页 |
| ·质粒的小量制备 | 第32页 |
| ·PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·双酶切鉴定 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-34页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第32-33页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第五章 重组蛋白的表达、纯化和抗体制备 | 第35-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第35-37页 |
| ·材料与设备 | 第35页 |
| ·订购试剂 | 第35页 |
| ·自配试剂 | 第35-37页 |
| ·Ni~(2+)柱亲和层析纯化用试剂 | 第35页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第35页 |
| ·抗体纯化试剂 | 第35-36页 |
| ·ELISA 试剂 | 第36页 |
| ·Westernblotting 用溶液 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-42页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第37页 |
| ·镍柱亲和层析纯化重组蛋白 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的大量表达与样品制备 | 第37-38页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第38页 |
| ·Millipore 除盐浓缩 | 第38页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第38-39页 |
| ·抗原的制备 | 第38-39页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第39页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第39页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第39-40页 |
| ·抗体特异性检测 | 第40-41页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第41-42页 |
| ·Bradford 法定量 | 第42页 |
| ·总蛋白的抽提 | 第42页 |
| ·Western blotting | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-46页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白纯化结果 | 第43-44页 |
| ·抗体效价测定 | 第44-45页 |
| ·Western blotting 检测 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 第六章 PGRMC2 在家蚕各时期、组织的分布 | 第47-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·试剂的配制 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-49页 |
| ·Western blotting 样品的获得 | 第48页 |
| ·Western blotting 检测PGRMC2 蛋白的分布 | 第48页 |
| ·总RNA 的提取 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第48页 |
| ·cDNA 的合成 | 第48-49页 |
| ·荧光定量PCR | 第49页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-56页 |
| ·Western blotting 分析家蚕五龄幼虫各组织中PGRMC2 蛋白的分布 | 第49-50页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的比较 | 第50-53页 |
| ·家蚕发育时期PGRMC2 的分布 | 第53页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第七章 PGRMC2 蛋白在家蚕BmN 细胞中的亚细胞定位研究 | 第57-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·试剂的配制 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 结论与创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
