| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 异分支酸酶（Isochorismatase）超家族 | 第13-14页 |
| ·烟酰胺酶家族 | 第13页 |
| ·烟酰胺酶相关的氨基水解酶家族 | 第13页 |
| ·氨甲酰肌氨酸酰胺水解酶家族 | 第13-14页 |
| ·异分支酸酶家族 | 第14页 |
| ·ycaC 相关基因产物家族 | 第14页 |
| 2 ycaC 及其相关蛋白 | 第14-18页 |
| ·ycaC 蛋白 | 第14-15页 |
| ·ycaCR 蛋白 | 第15-17页 |
| ·ycaCR 蛋白的进化树 | 第17-18页 |
| 3 展望 | 第18-19页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第19-21页 |
| 1 实验目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19页 |
| 3 实验流程图 | 第19-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-28页 |
| 1 生物信息学分析工具 | 第21页 |
| 2 分析流程及结果 | 第21-26页 |
| ·BmycaCR 基因基本信息 | 第21-22页 |
| ·BmycaCR 蛋白疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·BmycaCR 蛋白信号肽预测 | 第23页 |
| ·BmycaCR 蛋白跨膜区分析 | 第23-24页 |
| ·BmycaCR 蛋白定位预测 | 第24页 |
| ·BmycaCR 蛋白功能位点的预测 | 第24-25页 |
| ·BmycaCR 蛋白二级结构的预测 | 第25页 |
| ·BmycaCR 蛋白高级结构的预测 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 第四章 家蚕BmycaCR 基因的原核表达 | 第28-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·订购试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-31页 |
| 2 方法 | 第31-37页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第31-32页 |
| ·凝胶回收、纯化PCR 产物 | 第32-33页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli TG1 感受态细胞 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmycaCR 的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·挑斑与质粒抽提 | 第34页 |
| ·PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·BmycaCR 基因的表达 | 第35-37页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli Rosetta 感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmycaCR 的筛选与鉴定 | 第35页 |
| ·His-融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第35-36页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmycaCR 的鉴定 | 第38页 |
| ·His 融合蛋白的表达 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 融合蛋白的纯化及抗体制备 | 第40-50页 |
| 1. 材料与试剂 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·订购试剂 | 第40页 |
| ·主要试剂的配置 | 第40-42页 |
| 2. 方法 | 第42-46页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的大量表达与样品制备 | 第42页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第42-43页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度 | 第43页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| ·抗原的制备 | 第43页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第43页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第44-45页 |
| ·抗体特异性检测 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·质谱分析 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第47页 |
| ·Western blot 检测抗体的特异性 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 BmycaCR 蛋白的表达分析 | 第50-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·主要试剂的配制 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-55页 |
| ·总RNA 的提取 | 第51页 |
| ·DNA 酶消化 | 第51-52页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第52页 |
| ·荧光定量PCR | 第52-54页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第52-53页 |
| ·荧光定量PCR 反应体系 | 第53页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第53-54页 |
| ·家蚕五龄幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第54页 |
| ·Western blot 检测BmycaCR 蛋白的分布 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-59页 |
| ·家蚕发育过程中BmycaCR mRNA 转录水平分析 | 第55-56页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmycaCR mRNA 转录水平分析 | 第56-58页 |
| ·家蚕不同发育时期BmycaCR 蛋白表达量的比较 | 第58页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmycaCR 蛋白表达量的比较 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第七章 亚细胞定位 | 第61-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第61页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·试剂配制 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
