| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 文献综述 第一章 哺乳动物腔前卵泡体外培养研究进展 | 第14-24页 |
| 1 腔前卵泡的发育 | 第14-16页 |
| 2 卵泡体外培养体系研究进展 | 第16-17页 |
| 3 腔前卵泡/OGCs体外培养模型 | 第17-22页 |
| 3.1 培养方式对卵泡/OGCs体外培养的影响 | 第17-18页 |
| 3.2 培养时间对卵泡/OGCs体外培养的影响 | 第18-19页 |
| 3.3 促性腺激素对卵泡/OGCs体外培养的影响 | 第19-20页 |
| 3.4 卵泡细胞分泌因子对卵泡/OGCs体外培养的影响 | 第20-22页 |
| 3.5 其他因子对卵泡/OGCs体外培养的影响 | 第22页 |
| 4 结语 | 第22-24页 |
| 第二章 猪腔前卵泡来源卵母细胞-颗粒细胞体外培养体系优化 | 第24-46页 |
| 1 引言 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 试验耗材 | 第26页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 腔前卵泡选择 | 第27-28页 |
| 2.2.2 猪腔前卵泡来源卵母细胞-颗粒细胞复合物（PFs-OGCs）的分离 | 第28-29页 |
| 2.2.3 猪大囊卵泡来源卵母细胞-卵丘细胞复合物（COCs）的采集 | 第29页 |
| 2.2.4 PFs-OGCs的体外培养 | 第29页 |
| 2.2.4.1 PFs-OGCs有血清贴壁培养 | 第29页 |
| 2.2.4.1 PFs-OGCs无血清悬浮培养 | 第29页 |
| 2.2.5 体外培养OGCs存活率、成腔率及卵母细胞直径的统计与测定 | 第29-30页 |
| 2.2.6 猪卵母细胞的体外成熟培养 | 第30页 |
| 2.2.7 猪卵母细胞皮质颗粒染色 | 第30页 |
| 2.2.8 猪卵母细胞活性氧染色 | 第30页 |
| 2.2.9 猪卵母细胞透射电镜切片制作 | 第30-31页 |
| 2.2.10 统计与分析 | 第31页 |
| 3 试验设计 | 第31-32页 |
| 3.1 猪PFs-OGCs体外培养方式的比较 | 第31页 |
| 3.2 猪PFs-OGCs最佳体外培养时间的选择 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-41页 |
| 4.1 不同培养方式对猪PFs-OGCs生长发育的影响 | 第32-33页 |
| 4.2 不同培养时间对猪PFs-OGCs体外生长发育影响 | 第33-41页 |
| 4.2.1 猪PFs-OGCs体外贴壁培养不同培养时间的结果 | 第33-34页 |
| 4.2.2 卵母细胞直径与培养时间的关系 | 第34页 |
| 4.2.3 不同培养时间对GV期卵母细胞皮质颗粒分布影响 | 第34-35页 |
| 4.2.4 卵母细胞活性氧染色结果 | 第35-36页 |
| 4.2.5 猪卵母细胞透射电镜结果 | 第36-41页 |
| 4.2.5.1 透明带 | 第36-38页 |
| a 透明带形态 | 第36-37页 |
| b 透明带厚度 | 第37-38页 |
| 4.2.5.2 线粒体 | 第38-39页 |
| a 线粒体形态 | 第38页 |
| b 成熟线粒体所占的比例 | 第38-39页 |
| 4.3.5.3 脂滴 | 第39-40页 |
| a 脂滴的形态 | 第39页 |
| b 不同体外培养时间的卵母细胞胞质内脂滴直径变化 | 第39-40页 |
| 4.3.5.4 高尔基体 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-45页 |
| 5.1 PFs-OGCs体外培养方式筛选 | 第41-42页 |
| 5.2 PFs-OGCs体外培养时间筛选 | 第42页 |
| 5.3 体外培养对卵母细胞皮质颗粒分布的影响 | 第42-43页 |
| 5.4 体外培养对卵母细胞对活性氧水平影响 | 第43页 |
| 5.5 体外培养时间对卵母细胞透明带的影响 | 第43-44页 |
| 5.6 体外培养时间对卵母细胞内线粒体的影响 | 第44页 |
| 5.7 体外培养时间对卵母细胞内脂滴的影响 | 第44-45页 |
| 5.8 体外培养时间对卵母细胞高尔基体的影响 | 第45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 参与卵泡腔形成的分子筛选 | 第46-64页 |
| 1 引言 | 第46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-48页 |
| 2.1 材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第46页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第47页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第47页 |
| 2.2 试验方法 | 第47-48页 |
| 2.2.1 猪PFs-OGCs与EAFs-OGCs的分离 | 第47页 |
| 2.2.2 PFs-OGCs和EAF-OGCs cDNA文库制备 | 第47-48页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR | 第48页 |
| 2.2.4 RNA质量检测 | 第48页 |
| 3 试验设计 | 第48-49页 |
| 4 试验方法 | 第49-54页 |
| 4.1 文库的建立与测序 | 第49-50页 |
| 4.2 测序数据分析 | 第50-53页 |
| 4.2.1 分析流程图 | 第50页 |
| 4.2.2 原始序列数据处理 | 第50页 |
| 4.2.3 测序评估 | 第50-51页 |
| 4.2.3.1 测序长度分布 | 第50-51页 |
| 4.2.3.2 测序饱和度分析 | 第51页 |
| 4.2.3.3 基因覆盖度统计 | 第51页 |
| 4.2.3.4 基因表达量统计 | 第51页 |
| 4.2.3.5 基因功能注释 | 第51页 |
| 4.2.4 差异基因筛选 | 第51-53页 |
| 4.2.4.1 差异表达基因筛选 | 第51-52页 |
| 4.2.4.2 基因表达模式聚类分析 | 第52页 |
| 4.2.4.3 Gene Ontology功能显著性富集分析 | 第52-53页 |
| 4.2.4.4 Gene Ontology功能分类 | 第53页 |
| 4.2.4.5 Pathway显著性富集分析 | 第53页 |
| 4.3 基因芯片数据验证 | 第53-54页 |
| 5 结果与分析 | 第54-60页 |
| 5.1 RNA样品质量检测 | 第54-55页 |
| 5.2 测序结果分析 | 第55-57页 |
| 5.2.1 测序长度评估 | 第55页 |
| 5.2.2 测序饱和度分析 | 第55-56页 |
| 5.2.3 基因覆盖度分析 | 第56-57页 |
| 5.3 差异表达基因分析 | 第57-58页 |
| 5.4 Gene Ontology功能分类 | 第58页 |
| 5.5 KEGG pathway功能显著性富集分析 | 第58-59页 |
| 5.6 差异表达基因验证 | 第59-60页 |
| 6 讨论 | 第60-62页 |
| 6.1 与卵泡发育相关的信号通路 | 第60-62页 |
| 6.2 差异表达最高的10个基因功能 | 第62页 |
| 小结 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 附录 1 | 第70-71页 |
| 附录 2 | 第71-73页 |
| 附录 3 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简历 | 第75页 |
