| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-13页 |
| 1.1 MicroRNA的功能及其作用 | 第11页 |
| 1.2 亚甲基四氢叶酸还原酶的功能及与疾病的关系 | 第11页 |
| 1.3 肝细胞癌的发展现状及其影响因素 | 第11-12页 |
| 1.4 叶酸的功能效用 | 第12-13页 |
| 第2章 实验材料以及实验方法 | 第13-36页 |
| 2.1 实验材料和实验用试剂 | 第13-15页 |
| 2.1.1 实验所用细胞株 | 第13页 |
| 2.1.2 实验所用主要设备仪器 | 第13-14页 |
| 2.1.3 实验所用主要化学试剂 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-36页 |
| 2.2.1 细胞的培养和干预 | 第15-17页 |
| 2.2.2 载体的构建和双荧光素酶报告基因检测实验 | 第17-23页 |
| 2.2.3 miR223p mimic和miR1495p mimic转染HL-7702和QGY-7703细胞 | 第23-24页 |
| 2.2.4 加尾法RT-qPCR检测分析miR223p和miR1495p的表达量 | 第24-28页 |
| 2.2.5 RT-qPCR检测分析MTHFR、PDCD4和TP53INP1的表达量 | 第28-31页 |
| 2.2.6 Western Blot检测分析MTHFR的表达量 | 第31-33页 |
| 2.2.7 CCK-8 检测细胞增殖能力 | 第33-34页 |
| 2.2.8 胞内叶酸浓度测定 | 第34页 |
| 2.2.9 胞质阻断分裂微核分析细胞组学实验（CBMN-Cyt） | 第34-36页 |
| 第3章 实验结果 | 第36-59页 |
| 3.1 双荧光素酶验证结果分析 | 第36-39页 |
| 3.1.1 质粒构建结果：MTHFR 3’UTR野生型质粒及突变型 | 第36-37页 |
| 3.1.2 靶向MTHFR基因的理论miRNA预测 | 第37-38页 |
| 3.1.3 双荧光素酶验证结果：靶向MTHFR基因的理论miRNA | 第38-39页 |
| 3.2 miR223p和miR1495p的表达结果 | 第39-45页 |
| 3.2.1 人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞QGY-7703中在叶酸缺乏条件下，miR223p和miR1495p的表达上调 | 第39-40页 |
| 3.2.2 人正常结肠上皮细胞NCM460在叶酸缺乏条件下，miR223p的表达上调 | 第40-41页 |
| 3.2.3 人正常结肠上皮细胞CCD841CoN在叶酸缺乏条件下，miR223p和miR1495p的表达上调 | 第41-42页 |
| 3.2.4 人结直肠癌细胞COLO 205在叶酸缺乏条件下，miR223p和miR1495p的表达上调 | 第42-43页 |
| 3.2.5 转染miR223p和miR1495p后，人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞QGY-7703中miR223p和miR1495p的表达量 | 第43-44页 |
| 3.2.6 加尾法RT-qPCR质量控制 | 第44-45页 |
| 3.3 MTHFR、PDCD4、TP53INP1 mRNA水平表达结果 | 第45-52页 |
| 3.3.1 在人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞QGY-7703中，miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因mRNA水平的调控 | 第45-46页 |
| 3.3.2 在人正常结肠上皮细胞NCM460中miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因mRNA水平的调控 | 第46-47页 |
| 3.3.3 在人正常结肠上皮细胞CCD841CoN中miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因mRNA水平的调控 | 第47-48页 |
| 3.3.4 在人结肠癌细胞COLO 205中miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因mRNA水平的调控 | 第48-49页 |
| 3.3.5 长期叶酸缺乏影响PDCD4/TP53INP1的表达 | 第49-50页 |
| 3.3.6 人肝癌细胞QGY-7703 转染miR223p和miR1495p后，MTHFR mRNA水平的表达 | 第50页 |
| 3.3.7 RT-qPCR质量控制 | 第50-52页 |
| 3.4 MTHFR蛋白水平表达结果 | 第52-54页 |
| 3.4.1 在人正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞QGY-7703中， miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因蛋白水平的调控 | 第52-53页 |
| 3.4.2 在人正常结肠上皮细胞NCM460中，miR223p和miR1495p响应叶酸缺乏/充足对MTHFR基因蛋白水平的调控 | 第53-54页 |
| 3.4.3 人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞QGY-7703转染miR223p和mi R1495p后，MTHFR蛋白水平的表达 | 第54页 |
| 3.5 CCK-8 检测转染miR223p mimic或miR1495p mimic后QGY-7703细胞增殖能力 | 第54-55页 |
| 3.6 胞内叶酸检测 | 第55-57页 |
| 3.6.1 干预后人正常结肠上皮细胞CCD841CoN和结肠癌细胞COLO 205胞内叶酸浓度 | 第55-56页 |
| 3.6.2 干预后人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞QGY-7703胞内叶酸浓度 | 第56-57页 |
| 3.7 胞质阻断分裂微核分析细胞组学实验（CBMN-Cyt）结果 | 第57-59页 |
| 3.7.1 人正常肝细胞HL-7702CBMN结果 | 第57页 |
| 3.7.2 人正常肝细胞QGY-7703CBMN结果 | 第57-59页 |
| 第4章 讨论 | 第59-64页 |
| 4.1 miRNA靶向目标基因可能存在不同机制 | 第59-60页 |
| 4.2 miRNA靶向目标基因通过一碳代谢的抑制途径 | 第60-62页 |
| 4.3 miR-22的作用 | 第62页 |
| 4.4 miR-149的作用 | 第62-63页 |
| 4.5 MTHFR的作用 | 第63-64页 |
| 第5章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录A 自配试剂和溶液配方 | 第71-74页 |
| 附录B 文献综述 | 第74-85页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文和研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
